Installation de fenêtres optiques dans le cerveau de souris transgéniques pour imager les activités neuronales

Résumé

Source : Lin, X., et al. Imagerie de l’activité neuronale dans le cortex somatosensoriel primaire à l’aide de souris transgéniques Thy1-GCaMP6s. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo démontre l'enregistrement de l'activité neuronale du cerveau à travers une fenêtre optique chez des souris transgéniques. Les souris expriment une protéine fluorescente qui permet de détecter les activités neuronales. Une petite partie du crâne est soigneusement retirée pour installer une fenêtre optique, puis le crâne est recouvert de ciment noir pour bloquer la lumière avant l’imagerie.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation de l’animal pour l’imagerie

1. Placez de la gaze stérile, des cotons-tiges et des outils chirurgicaux autoclavés dans la zone de chirurgie. Allumez un stérilisateur à microbilles pour la stérilisation interchirurgicale des outils chirurgicaux.
2. Anesthésier la souris (mâle ou femelle, 1,5 à 2,5 mois, 20 à 25 g) par injection intrapéritonéale (i.p.) d’un mélange de kétamine (17,2 mg/mL), de xylazine (0,475 mg/mL) et d’acépro....

Résultats

Graphique 1. Création de fenêtres bilatérales sur le crâne. (A) Une image photographique montre 2 fenêtres optiques crâniennes de chaque côté du crâne recouvrant la zone S1. (B) Grossissement élevé de la région encadrée de l’image (A) montrant des fenêtres optiques bilatérales exposant la dure-mère et les vaisseaux sanguins sous-jacents. Barre d’échelle = 680 μm. (C) Le crâne exposé. (D) Créat.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
C57BL/6J-Tg(Thy1-GCaMP6s)GP4.3Dkim/J	Jackson	Référence 24275	Il peut s’agir de n’importe quelle souche produite par l’indicateur neuronal génétiquement codé et l’effecteur exprimant l’indicateur de calcium fluorescent vert, GCaMP, dans des sous-ensembles de neurones excitateurs dans le cortex.
N° B6. Cg-Tg(Thy1-EGFP)OJrs/GfngJ.	Jackson	Référence 7919	Il peut s’agir de n’importe quelle souche exprimant EGFP dans des sous-ensembles de neurones au sein de populations spécifiques du cortex, fournissant une coloration brillante et vitale de type Golgi.
Pince Dumont n° 5, standard, Dumoxel	Outils scientifiques fins	Référence 11251-30	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Pince Dumont n° 5SF	Outils scientifiques fins	Référence 11252-00	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Stérilisateur à microbilles	Matériel de laboratoire du Sud	Réf. B1201	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Adaptateur de maintien de tête SG-4N de Harishige	Recherche Tritech	SG-4N	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Kit complet de micro-foret idéal	Appareil de Harvard	Référence 72-6065	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Meules pour micro-foret	Outils scientifiques fins	Référence 19007-05	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Verre de protection rond, 3 mm	Biosciences de Harvard	Tél. W4 64-0720	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Verre de protection rond, 5 mm	Biosciences de Harvard	W4 64-0700	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Adhésif optique Norland	Produits Norland	Référence 7106	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Super colle liquide Loctite	WB Mason	LOC1647358	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Kit de ciment de préhension, poudre et solvant	Dentsply	Référence 675570	Peut être n’importe quelle marque de choix. Mélangez 5 parties de poudre de ciment dentaire blanc (Grip Cement) avec une partie de peinture en poudre Tempera noire (pour protéger de la lumière ; certains utilisateurs préfèrent un rapport de 10 : 1).
Mousse de gel	Moore Médical	Référence 2928	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Micro ciseaux de dissection	Roboz	RS-5841	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Liquide céphalo-rachidien artificiel (PPA)	-	-	L’ACSF contient 125 mM de NaCl, 4,5 mM de KCl, 26 mM de NaHCO3, 1,25 mM de NaH2PO4, 2 mM de CaCl2, 1 mM de MgCl2 et 20 mM de glucose. Faites buller l’ACSF avec de l’oxygène (95 % d’oxygène, 5 % de dioxyde de carbone) et ajustez le pH à 7,4. Préparez une solution ACSF fraîche avant chaque expérience.