$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Implantation d’électrodes VEP
- Anesthésier l’animal par une injection intrapéritonéale de kétamine (75 mg/kg) et de médétomidine (0,5 mg/kg).
note: Suite à l’induction de l’anesthésie, observez les réflexes de retrait (test de pincement, réflexe cornéen et palpébral, etc.) et leur absence comme indication pour débuter la chirurgie. Surveiller continuellement les animaux tout au long de la chirurgie et administrer des anesthésiques supplémentaires (10 % de la dose initiale de kétamine par appoint) si les réflexes sont présents. Des rats adultes (>12 semaines) sont utilisés dans les expériences.
- Rasez la peau de la zone chirurgicale. Placez l’animal sur un coussin chauffant (37 °C) pour maintenir la température corporelle pendant la chirurgie. Préparez la peau par l’application topique de povidone iodée. Appliquez un drapé chirurgical. Appliquez une pommade ophtalmique topique pour prévenir la sécheresse cornéenne sous anesthésie générale. Maintenir l’asepsie à l’aide d’instruments stériles.
- Faites une incision cutanée longitudinale sur la ligne médiane de la peau de la tête. Nettoyez le tissu conjonctif pour obtenir une bonne exposition du crâne.
- Percez soigneusement de petits trous de bavure manuellement à l’aide d’une micro-perceuse à main à 7 mm derrière le bregma et à 3 mm latéralement par rapport à la ligne médiane.
- Implanter des électrodes vissées à travers le crâne dans le cortex (zone 17), pénétrant dans le cortex jusqu’à une profondeur d’environ 0,5 mm. Implanter une électrode à vis de référence sur la ligne médiane rostrale de 3 mm par rapport au bregma. Appliquez du ciment dentaire pour enrober et fixer les vis (pas toujours nécessaire).
- Suturez la peau de la tête, administrez une pommade antibiotique sur la peau et laissez l’animal se remettre de l’anesthésie sur un coussin chauffant.
Remarque : Alternativement, les électrodes peuvent être laissées exposées afin que la peau n'ait pas besoin d'être rouverte à chaque enregistrement. Immédiatement après l’arrêt de la chirurgie, mais avant la récupération anesthésique, administrer un anti-inflammatoire non stéroïdien (AINS) (s’il n’a pas été administré en préopératoire) ou un analgésique opioïde. Surveillez constamment les animaux jusqu’à ce qu’ils se remettent complètement de l’anesthésie et qu’ils soient ambulatoires.
- Prévoyez au moins 1 semaine pour que les animaux se remettent de l’opération avant l’enregistrement VEP.
2. Enregistrement VEP
- Anesthésier l’animal et préparer la peau comme 1.1 et 1.2.
Remarque : Une dose plus faible d’anesthésiques peut être utilisée pour l’enregistrement électrophysiologique (kétamine 40 mg/kg et médétomidine 0,25 mg/kg).
- Placez le rat dans une pièce sombre et laissez-le s’adapter à l’obscurité pendant 5 à 30 minutes. Dans certains cas, les rats peuvent être adaptés à l’obscurité pour les enregistrements scotopiques ou à la lumière pour les enregistrements photopiques VEP.
- Maintenir la température corporelle à 37 ± 0,5 °C par le système de couverture homoéthermique avec une sonde de thermomètre rectal.
- Dilater les pupilles avec 1,0 % de gouttes ophtalmiques de tropicamide. Ouvrez la peau au-dessus du crâne pour accéder aux électrodes à vis in situ pré-placées.
- Connectez la vis sur le cortex visuel controlatéral de l’œil stimulé et la vis de référence sur l’amplificateur. Insérez une électrode à aiguille dans la queue comme la terre. Mesurez et maintenez l’impédance de l’électrode en dessous de 5 kΩ.
- Placez un mini-stimulateur Ganzfeld directement sur la peau autour des paupières pour fournir une isolation oculaire supérieure. L’éclairage du stimulateur doit être calibré au préalable par un photomètre.
- Fournit une stimulation photique par le biais de flashs lumineux 100 fois à une fréquence de 1 Hz, avec des réglages de filtre passe-bande bas et haut de 1 et 100 Hz, respectivement. La fréquence d’échantillonnage du signal est de 5 kHz.
Remarque : Les signaux doivent être échantillonnés à au moins 250 - 300 Hz pour s’assurer que plus de deux échantillons sont prélevés au cours de chaque cycle.
- Suturez la peau et maintenez les animaux sur un coussin chauffant pour récupérer de l’anesthésie. L’enregistrement peut être enregistré de manière répétée sur des animaux individuels afin de surveiller les changements fonctionnels sur une période de temps.