Surveillance du cortex cérébral à l’aide d’un réseau d’électrodes multiples en réponse à des agents provoquant des crises d’épilepsie

Abstract

Source : Lu, H. C., et al. Stimulation à courant continu et enregistrement multi-électrodes de l’activité de type convulsif dans la préparation de coupes de cerveau. J. Vis. Exp. (2016).

Dans cette vidéo, les effets de la stimulation transcrânienne à courant continu (tDCS) sur des tranches de cerveau contenant les régions du cortex cingulaire antérieur (ACC) et du thalamus sont étudiés, à l’aide d’un réseau multi-électrodes (MEA) pour mesurer les signaux électriques. En délivrant des impulsions électriques et en infusant des médicaments provoquant des crises, l’étude étudie la réponse ACC aux crises.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Préparation de la solution expérimentale et de l’équipement pour l’enregistrement MEA (multi-électrodes)

1. Préparez du liquide céphalo-rachidien artificiel (aCSF ; 124 mM de NaCl, 4,4 mM de KCl, 1 mM de NaH₂PO₃, 2 mM de MgSO₄, 2 mM de CaCl₂, 25 mM de NaHCO₃ et 10 mM de glucose, avec 95 % d’O₂ et 5 % de CO₂).
2. Utilisez deux types de sondes MEA : 6 x 10 MEA planes et 8 x 8 MEA. La première sonde ....

Results

Graphique 1 : Préparation de la tranche de thalamocingulate et configuration du système d’enregistrement MEA. (A) PROCÉDURE DE COUPE MT-ACC (a) Retirer le cerveau et (b) transférer dans un LCR acarbonisé froid. (c) Faites deux coupes parasagittales à partir de la ligne médiane. (d) Vue latérale de la partie médiale du bloc cérébral. (e) Faites deux coupes ventrales angulaires du bloc cérébral........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
L’isoflurane	Corporation de produits d’halocarbures	NDC 12164-002-25	4 %
LCR (total : 1 L) :
D(+)-Glucose	Merck	Référence 1.08337.1000	10 millions d’euros
Hydrogénocarbonate de sodium	Merck	Référence 1.06329.0500	25 millions d’euros
chlorure de sodium	Merck	Tél. : 1.06404.1000	124 millions d’euros
(+)-L-ascorbate de sodium, >=98 %	sigma	A4034-100G	0,15 g/2 c.c
Sulfate de magnésium, anhydre, ReagentPlus	sigma	M7506-500G	2 millions d’euros
Chlorure de calcium dihydraté	Merck	Référence 1.02382.1000	2 millions d’euros
Dihydrogénophosphate de sodium monohydraté	Merck	Référence 1.06346.1000	1 million d’euros
chlorure de potassium	May & Baker LTD, Dagenham, Angleterre	MS 7616	4,4 millions d’euros
(+)-Bicuculline	TOCRIS	130	5 μM dans un LCR a.
4-aminopyridine	TOCRIS	940	250 μM dans un LCR a.
Vibratome	Vibratome	Série 1000	Découpez en blocs en tranches de 500 μm d’épaisseur
Sondes multiélectrodes (MEA) : 6 x 10 MEA planes	Systèmes multicanaux	60MEA500/30iR-Ti-pr MEAS 6x10	diamètre des électrodes, 30 μm ; espacement des électrodes, 500 μm ; impédance, 50 kΩ à 200 Hz
Sondes multiélectrodes (MEA) : 8 x 8 MEA	Ayanda Biosystems	60MEA200/10iR-Ti-pr MEAS 8x8	électrode de forme pyramidale ; diamètre, 40 μm ; hauteur de pointe, 50 μm ; espacement des électrodes, 200 μm ; impédance, 1 000 kΩ à 200 Hz
Un amplificateur à 60 canaux a été utilisé avec un filtre passe-bande réglé entre 0,1 Hz et 3 KHz à une amplification de 1 200X	Systèmes multicanaux	MEA-1060-BC
Logiciel MC Rack à une fréquence d’échantillonnage de 10 KHz	Systèmes multicanaux		Logiciel de collecte et d’enregistrement de données
contrôle d’un générateur d’impulsions	Systèmes multicanaux	STG 1002
Kits d’ancrage et fixations	Warner Instruments	SHD-26H/10 ; Référence : WI64-0250
Pompe péristaltique-minipuls3	Gilsom	MINIPULS3	Taux de perfusion : 8 ml/min
Stimulateur isolé	Systèmes A-M	Modèle 2100	intensité de ±350 μA, durée de 200 μsec
Électrode de tungstène	Systèmes A-M	Référence 575300	placé dans le thalamus