Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.
1. Enregistrement des réponses synaptiques dans une chambre de coupe par immersion
NOTE : Voir le tableau des matériaux .
- Préchauffez la solution d’aCSF dans un bain-marie à environ 28-30 °C (cela évitera la formation de bulles dans la chambre d’enregistrement).
- Démarrez le système de recyclage (4-5 mL/min) et activez le chauffage en ligne pour équilibrer le système pendant au moins 1 h.
- Prétrempez un petit morceau de papier de nettoyage d’objectif et un treillis en nylon fixé sur un fil de platine en forme de U dans la chambre de tranche d’immersion pendant quelques minutes (Figure 1).
- Retirez le fil de platine en forme de U.
- Arrêtez le recyclage et placez une tranche sur le papier de nettoyage de l’objectif.
- Placez immédiatement le treillis de maintien de la tranche sur la tranche, allumez la pompe et laissez la tranche s’équilibrer pendant 30 minutes sans plonger l’objectif dans l’aCSF.
- Remplissez la micropipette en borosilicate (, c’est-à-dire l’électrode enregistreuse) avec de l’aCSF (résistance de la pointe : 1-2 MΩ, remplie 1/3 avec de l’aCSF) et montez-la dans le porte-pipette.
- Placez l’électrode de stimulation en tungstène isolée à l’époxy testée dans le support du manipulateur et les fils de référence dans la chambre de tranche.
- Ajoutez une deuxième électrode de référence à la chambre et connectez-la à la prise de référence de la tête de l’électrode d’enregistrement (Figure 1A).
- Dans le logiciel de contrôle de l’amplificateur, cliquez sur la case « mode pince zéro » et continuez en double-cliquant sur la case « liste de gain de sortie ». Choisissez un gain de « 100 », double-cliquez sur la « boîte de liste de filtre passe-haut (Bessel) », choisissez « 0,1 Hz » et double-cliquez sur la « zone de liste de filtre passe-bas (AC) » pour choisir « 3 kHz"
- Dans le logiciel d’enregistrement, cliquez sur "Acquérir | Choisissez un protocole dont les paramètres permettent des stimulations épisodiques et la numérisation de potentiels amplifiés à 10-20 kHz pendant 50-100 ms et qui déclenche automatiquement un isolateur de stimulus 10 ms après le début d’un enregistrement épisodique.
- Placez les électrodes de stimulation et d’enregistrement en ligne et parallèlement à la couche pyramidale, par exemple (Figure 1B et Figure 2).
- Cliquez sur « Acquérir | Modifier le protocole » et choisissez l’onglet « déclencheur » (dans la fenêtre contextuelle). Cliquez sur la case « source du déclencheur » et choisissez « barre d’espace » comme source du déclencheur. Cliquez sur le bouton « OK ». Cliquez sur le bouton « enregistrer » pour démarrer l’acquisition et notez la fenêtre contextuelle avec un bouton de déclenchement.
- Dans le logiciel d’isolateur de stimulus, cliquez sur la case « contrôle de tension » et entrez « 0 ». Cliquez sur le bouton « télécharger ». Cliquez sur la fenêtre « logiciel d’enregistrement » et appuyez sur la barre d’espace. Répétez ce cycle en saisissant séquentiellement des valeurs de 1 à 8, par exemple, par pas de 1 mV dans la case « contrôle de tension ».
- Corrélez la force de stimulation avec les valeurs de pente fEPSP et déterminez la force de stimulation nécessaire pour obtenir 40 % de la pente maximale de la fEPSP. Cliquez sur la « case de contrôle de tension » et entrez la valeur déterminée. Cliquez sur le bouton « télécharger ».
REMARQUE : Un isolateur de stimulus est utilisé pour appliquer de brèves impulsions de tension ou de courant au tissu cérébral. Les impulsions biphasiques peuvent avoir 100 μs par phase.
- Dans le logiciel d’enregistrement, cliquez sur le bouton d’arrêt puis sur le menu « Acquérir ». Cliquez sur « Modifier le protocole » et choisissez l’onglet « Déclencheur » dans la fenêtre contextuelle. Cliquez sur la case de la source du déclencheur et choisissez le « minuteur interne » comme source du déclencheur. Cliquez sur le bouton « OK ». Cliquez sur le bouton d’enregistrement qui lance l’enregistrement automatique des potentiels de champ toutes les 30 s, par exemple. Cliquez sur le bouton « arrêter » après 30-60 min.
- Cliquez sur le menu « Acquérir », cliquez sur « Ouvrir le protocole », choisissez le protocole d’induction de plasticité synaptique souhaité, et cliquez sur le bouton « OK ». Cliquez sur le bouton « enregistrer » pour activer automatiquement la stimulation et l’enregistrement à haute fréquence. Cliquez sur le bouton « stop ».
REMARQUE : Dans le cas d’études relatives à la plasticité synaptique, appliquez l’un des paradigmes d’induction standard pour la potentialisation à long terme ou la dépression à long terme après un enregistrement de base prolongé. Des exemples représentatifs de la modulation résultante de la transmission synaptique sont représentés dans Figure 4 et Figure 5.
- Dans le logiciel d’enregistrement, cliquez sur « Acquérir | Ouvrez le protocole" et choisissez le même protocole qu’à l’étape 4.12. Cliquez sur le bouton « OK », puis sur « enregistrer ». Continuez à exécuter automatiquement les enregistrements potentiels sur le terrain pendant 2 à 4 h, par exemple. Cliquez sur le bouton « arrêter » pour terminer l’enregistrement.
- Dans le cas d’études pharmaceutiques, appliquer le composé directement dans le réservoir d’aCSF si une administration permanente du composé est souhaitée (Figure 3).
