Lésion mécanique des nerfs segmentaires des larves de drosophile pour induire une neurodégénérescence

Résumé

Source : Danella, E. B., et al. Une méthodologie simple de lésion mécanique neuronale pour étudier la dégénérescence des motoneurones de la drosophile. J. Vis. Exp. (2017).

La vidéo démontre l’induction de la neurodégénérescence chez les nerfs segmentaires des larves de drosophile via une lésion mécanique. La cuticule ventrale des larves anesthésiées est pincée à l’aide d’une pince pour causer des lésions aux nerfs segmentaires. Les larves blessées sont maintenues avec de la nourriture, ce qui permet à la blessure de provoquer une dégénérescence des motoneurones dans les nerfs, provoquant une perturbation de leurs jonctions neuromusculaires (NMJ).

Protocole

1. Préparation des réactifs et de l’équipement

1. Préparez 1 tampon de dissection (70 mM de NaCl, 5 mM de KCl, 0,02 mM de CaCl₂, 20 mM de MgCl₂, 10 mM de NaHCO₃, 115 mM de saccharose, 5 mM de tréhalose, 5 mM d’acide hydroxyéthylpipérazine éthane sulfonique [HEPES] ; pH 7,2).
2. Préparez 1x solution saline tamponnée au phosphate (PBS).
3. Préparez 1x PBT en utilisant 1x PBS avec 0,01 % Triton X-100.
4. Préparez des plaques de gélose au jus de fruits.14 Brièvement, mélangez 30 g de gélose dans 700 mL de H₂O et d’autoclave. Dissoudre 0,5 g de méthylparabène dans 10 mL d’éthanol et....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ciseaux de micro-dissection	Outils scientifiques fins	Référence 15000-08
Pince Dumont #3	Outils scientifiques fins	Référence 11231-30	Certaines personnes préfèrent la taille 3, tandis que d’autres préfèrent la taille 5
Pince Dumont #5	Outils scientifiques fins	Référence 11251-30	Certaines personnes préfèrent la taille 3, tandis que d’autres préfèrent la taille 5
Réservoir d’air CO2	Air technique	No ONU 1013	Différentes tailles de réservoirs peuvent être achetées
Appareil d’anesthésie au CO2	s Genesee Scientific	59 à 114
Goupilles en acier inoxydable, taille 0,1	Outils scientifiques fins	Référence 26002-10
SylGard 184 Élastomère, base et agent de durcissement	Dow Corning	Référence 3097358-1004	Pour couler des plaques de dissection
Dissection d’un microscope stéréo	AmScope	SM-1BZ
source lumineuse	AmScope	HL150-AY-220V
Flystuff Jus de raisin Agar Prémix	Genesee Scientific	47 à 102
Lames de microscope	Genesee Scientific	29 à 101
Lamelles en verre	Fisher Scientific	Tél. : 12-545-87
Thermo Scientific Nalgene Boîte utilitaire	Fisher Scientific	Référence 03-484C	Utilisé pour créer une chambre humide pour la récupération des larves