Neuropathologie

Pour détecter l’atrophie cérébrale, commencez par des lames portant les sections de cerveau déparaffinisées à partir de modèles de souris neurodégénératives à différents âges.

Pour visualiser ces NP, prenez une section de cerveau humain déparaffinisée et fixe.

Ajoutez de l’eau distillée deux fois pour laver les sections.

Traitez les tissus avec du tétroxyde d’osmium pour stabiliser les structures cellulaires, y compris la lipofuscine.

Homogénéiser le tissu pour libérer des protéines dans le tampon. Les inhibiteurs de la protéase bloquent l’activité de la protéase, empêchant la dégradation des protéines.

Ajoutez un tampon de chargement contenant un détergent, un agent réducteur et un colorant de suivi.

Incuber avec une enzyme protéolytique pour digérer les prions normaux, en laissant intacts les agrégats résistants.

Incuber avec une solution de peroxyde d’hydrogène pour inhiber les peroxydases endogènes et prévenir les colorations non spécifiques.

Ces sections contiennent des enchevêtrements neurofibrillaires, des agrégats anormaux de protéine tau présents dans les neurones de l’hippocampe.

Pour visualiser l’héparane sulfate, commencez par une coupe de tissu hippocampique humain malade contenant des plaques amyloïdes.

Centrifuger l’échantillon pour granuler les débris cellulaires et recueillir le surnageant.

Ce protocole décrit l’extraction de protéines à partir de cellules cancéreuses neuronales. Les cellules sont lavées à l’aide d’un tampon et lysées par perturbation enzymatique et mécanique. Le surnageant riche en protéines extrait est collecté après centrifugation.

Cette vidéo montre la procédure de coloration fluorescente des neurones corticaux de rat pour la microscopie. Il cible l’actine F et les protéines dendritiques pour analyser l’intégrité structurelle et calculer la densité de l’actine F, ce qui est crucial pour l’étude de la fonction neuronale et de la santé.

Cette vidéo démontre le protocole d’isolement des fibrilles amyloïdes à partir d’extraits de tissu cérébral de souris en utilisant la centrifugation à gradient de densité et la digestion de protéines non amyloïdes.

Cette vidéo décrit la génération d’un modèle de lésion neuronale à l’aide d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans les neurones primaires du cervelet de souris. Il détaille le processus d’induction du stress oxydatif par l’ajout de fortes concentrations de peroxyde d’hydrogène. L’exposition aux ROS provoque des cassures de brins d’ADN et une instabilité génomique. De plus, l’oxydation des protéines cellulaires altère leurs fonctions, tandis que la peroxydation lipidique compromet l’intégrité...

Cette vidéo présente une méthode permettant d’évaluer les effets neurotoxiques des nanoparticules à l’aide de la microglie. Il décrit les étapes d’activation de la microglie avec des nanoparticules, de filtrage des milieux conditionnés pour isoler les cytokines pro-inflammatoires dérivées de la microglie et de test de la toxicité des neurones hypothalamiques avec les milieux conditionnés.

La vidéo démontre l’induction de la neurodégénérescence chez les nerfs segmentaires des larves de drosophile via une lésion mécanique. La cuticule ventrale des larves anesthésiées est pincée à l’aide d’une pince pour causer des lésions aux nerfs segmentaires. Les larves blessées sont maintenues avec de la nourriture, ce qui permet à la blessure de provoquer une dégénérescence des motoneurones dans les nerfs, provoquant une perturbation de leurs jonctions neuromusculaires (NMJ).

Cette vidéo montre une procédure permettant de créer un modèle de rat de la maladie de Parkinson en injectant la neurotoxine 6-hydroxydopamine (6-OHDA) dans le cerveau. La perfusion de neurotoxines dans le faisceau médial du cerveau antérieur (MFB) cible spécifiquement les neurones dopaminergiques responsables du contrôle moteur, conduisant à leur destruction et à la réplication des symptômes de la maladie de Parkinson.

Dans cette vidéo, un protocole par étapes pour les cellules souches embryonnaires humaines dans les organoïdes neuraux est démontré. La méthode consiste à induire la formation de rosettes neuronales, suivie d’une maturation contrôlée et d’une culture finale sur une membrane hydrophobe pour obtenir des organoïdes neuronaux pleinement développés.

Cette vidéo démontre la différenciation des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) en neurones dopaminergiques, afin de fournir un modèle pour l'étude de la maladie de Parkinson. Les CSEh sont cultivées dans un milieu d’induction neuronale dans une plaque de micropuits pour former des neurosphères 3D. Ceux-ci sont ensuite cultivés dans un milieu d’induction neuronale pour favoriser la différenciation en neurones progéniteurs dopaminergiques. La maturation finale des neurones se produit...

Cette vidéo montre une évaluation in vitro de l’effondrement du cône de croissance neuronale par des agrégats de β amyloïde (Aβ). Le traitement des neurones avec des agrégats Aβ provoque une déstabilisation du cytosquelette, entraînant l’effondrement des cônes de croissance à l’extrémité des axones. Les cellules traitées sont comparées à des cellules témoins pour évaluer l’étendue de l’effondrement du cône de croissance.

La vidéo montre une procédure de préparation de coupes de cerveau cortical humain de patients atteints de la maladie d'Alzheimer pour l'analyse du dépôt de peptides bêta-amyloïdes (Aβ) à l'aide de la spectrométrie de masse MALDI-IMS (Matrix assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry). Les étapes comprennent la préparation des lames, le traitement des tissus pour améliorer l’ionisation et l’analyse de la distribution spatiale des peptides bêta-amyloïdes.

Cette vidéo démontre l’immunocoloration des neurones traités avec des agrégats d’alpha-synucléine (αS). Les neurones sont d’abord traités avec des agrégats αS. Ils sont ensuite fixés, perméabilisés et traités avec une solution bloquante. Des anticorps primaires sont ajoutés, suivis d’anticorps secondaires marqués par fluorescence et d’une coloration nucléaire. L’échantillon est ensuite monté et observé au microscope.

Cette vidéo montre une procédure pour induire la dégénérescence rétinienne chez le poisson-zèbre adulte à l’aide d’une lésion laser. Le laser cible les cellules photoréceptrices de la rétine, déclenchant la mort cellulaire et un processus dégénératif. Ces dommages activent les cellules gliales de Müller (MG), entraînant leur dédifférenciation en progéniteurs de cellules souches qui aident à la régénération rétinienne.

Cette vidéo montre la procédure d'injection de peptides amyloïdes monomères dans le cerveau antérieur d'un poisson-zèbre adulte pour générer une toxicité amyloïde, imitant les lésions neuronales observées dans la maladie...

Cette vidéo montre le protocole de mesure de l’activation des récepteurs odorants dans les cellules transfectées à l’aide d’un biocapteur d’adénosine monophosphate cyclique (AMPc) et de la détection de luminescence. La méthode est appliquée pour étudier les interactions récepteur-ligand et les voies de signalisation dans les neurones olfactifs.

Cette vidéo montre la procédure d’injection de peptides bêta-amyloïdes, de chlorure d’aluminium et d’un facteur de croissance neuro-inflammatoire, qui contribuent collectivement à la formation de plaques amyloïdes toxiques dans la région de l’hippocampe. Cela provoque des troubles de la mémoire chez le rat, caractéristiques de la maladie d'Alzheimer.

Cette vidéo démontre l'infusion stéréotaxique précise de bêta-amyloïde dans le gyrus denté pour établir un modèle murin de la maladie d'Alzheimer. La détermination précise des coordonnées et l'administration contrôlée des protéines bêta-amyloïdes entraînent une dégradation neuronale, perturbent le traitement de la mémoire et contribuent au développement de la maladie d'Alzheimer.

Cette vidéo montre l’injection de fibrilles d’alpha-synucléine dans une souris pour induire une neuroinflammation. Les fibrilles sont injectées par voie intrapéritonéale dans une souris transgénique exprimant des protéines alpha-synucléines mutées. Lorsqu’elles atteignent le système nerveux central, les fibrilles pénètrent dans les neurones et induisent l’agrégation des protéines mutées. Les agrégats se propagent aux neurones voisins, aux microglies et aux astrocytes. La reconnaissance des...

Cette vidéo montre la procédure d’imagerie in vivo de C. elegans exprimant des protéines de type prion marquées avec une protéine fluorescente rouge. Le protocole consiste à immobiliser les nématodes sur un tampon d’agarose pour une microscopie confocale en accéléré, révélant l’agrégation et le transport des protéines à l’intérieur et entre les cellules. Cette technique est cruciale pour étudier l’agrégation des protéines liées aux maladies neurodégénératives.

Cette vidéo montre le processus d'injection d'un vecteur viral dans la substance noire du rat pour modéliser la maladie de Parkinson. Il décrit les étapes de préparation du rat, de micro-injection du vecteur viral dans la substance noire et la procédure de récupération.

Cette vidéo explique le processus d’isolement et d’enrichissement des agrégats de protéines insolubles au détergent à partir de tissus cérébraux humains congelés post-mortem. Il présente les étapes clés, notamment l’homogénéisation, le traitement détergent, la sonication et l’ultracentrifugation pour séparer et purifier les agrégats insolubles. La dernière étape consiste à solubiliser les agrégats dans un tampon d’urée pour une analyse plus approfondie.

Cette vidéo démontre l’imagerie et la quantification des agrégats de protéines dans des cerveaux de drosophiles génétiquement modifiés. Les cerveaux sont fixés, lavés et traités avec un agent anti-décoloration avant d’être montés. Les images sont capturées à l’aide d’un microscope confocal et quantifiées pour observer la transmission des agrégats de protéines mutantes.

Cette vidéo présente un protocole pour étudier la co-localisation de l’orexine et des récepteurs cannabinoïdes dans le tissu cérébral adulte du poisson-zèbre adulte de l’obésité normale et induite par l’alimentation (DIO) à l’aide de l’immunofluorescence.

Cette vidéo démontre le processus de quantification de l’accumulation d’alpha-synucléine dans les neurones dopaminergiques embryonnaires de souris prétraités avec des fibrilles préformées d’alpha-synucléine. Il décrit les étapes de fixation, de coloration et de quantification des neurones dopaminergiques contenant des agrégats d’alpha-synucléine à l’aide de l’immunofluorescence.

Cette vidéo montre comment mesurer l’activité du protéasome dans différents compartiments subcellulaires de l’amygdale latérale à partir de cerveaux de rats conditionnés par la peur et contrôler à l’aide d’un test peptidique fluorogénique. Le protéasome clive le substrat peptidique fluorogène, libérant des molécules fluorescentes, qui sont quantifiées à l’aide d’un lecteur de plaques pour évaluer l’activité du protéasome dans les fractions protéiques nucléaires et synaptiques. L’augmentation de...

Cette vidéo démontre le processus d'induction de dyskinésies induites par la lévodopa dans un modèle de rat atteint de la maladie de Parkinson en administrant de la lévodopa en même temps qu'un inhibiteur de conversion de la dopamine. Les injections répétées stimulent excessivement les neurones cérébraux, ce qui entraîne un dysfonctionnement moteur.

Cette vidéo démontre l’induction de la douleur neuropathique orofaciale dans un modèle de rat en ligaturant le nerf infra-orbitaire. Cela entraîne des lésions nerveuses et une inflammation, provoquant une signalisation anormale de la douleur et imitant des conditions de douleur chronique, qui peuvent être utilisées pour étudier le dosage de la douleur orofaciale.

Cette vidéo démontre la méthode de détection des neurones vieillissants dans les coupes organoïdes corticales par coloration pour l’activité de la bêta-galactosidase, qui est élevée dans les cellules sénescentes. L’enzyme clive un substrat pour produire un produit bleu, suivi d’une observation microscopique des neurones colorés.

Cette vidéo montre la génération d’un modèle murin de démyélinisation focale à l’aide d’une injection de lysophosphatidylcholine (LPC) en deux points. Le crâne d’une souris anesthésiée est exposé. Les coordonnées d’injection sont déterminées et un trou est percé pour permettre les injections de LPC aux sites ciblés. La LPC induit une démyélinisation focale des neurones via l’inflammation, tandis qu’une injection en deux points assure sa pérennité.

Cette vidéo démontre le processus de visualisation d’un interneurone rempli de biocytine dans une coupe d’hippocampe de rat, mettant en évidence son identité neurochimique grâce à l’utilisation d’anticorps spécifiques et de la microscopie à fluorescence.

Cette vidéo démontre la coloration immunohistochimique de la protéine S-100 dans des coupes de biopsie par aspiration rectale. Les sections récupérées de l'antigène sont bloquées et traitées avec des anticorps primaires, suivis d'anticorps secondaires contre le S-100, un marqueur de la maladie de Hirschsprung. Un substrat chromogène est ajouté pour colorer les cellules ciblées. Les échantillons sont déshydratés et montés avant d’être visualisés au microscope.

Cette vidéo montre la méthode d’induction de la démyélinisation dans les neurones de la moelle épinière de souris à l’aide d’injections de lysolécithine, suivie d’une remyélinisation par la migration et la différenciation des cellules précurseurs d’oligodendrocytes. Le processus altère puis rétablit progressivement la transmission du signal neuronal.

Cette vidéo démontre le processus de transduction de cellules neuronales humaines avec un lentivirus codant pour une protéine tau humaine mutante marquée avec une protéine fluorescente jaune (YFP) pour étudier l’agrégation de protéines. Il décrit les étapes de l’entrée virale à l’expression de la protéine tau mutante, aboutissant à la formation d’agrégats cytoplasmiques visibles de tau dans les neurones.

Cette vidéo démontre le marquage des cellules neuronales avec des anticorps pour les complexes de la chaîne respiratoire mitochondriale, la protéine associée à l’ADN mitochondrial et la protéine de la membrane externe mitochondriale, suivi d’une cytométrie en flux pour quantifier leurs niveaux.

Cette vidéo montre la procédure de mesure de l’activité de la γ-sécrétase dans des cellules humaines génétiquement modifiées à l’aide d’un système inductible par la tétracycline. Le processus consiste à induire l’expression du gène APP avec la tétracycline, à générer des peptides β amyloïde et à activer la production de luciférase. La bioluminescence résultant de la réaction luciférase-substrat est ensuite mesurée, reflétant l’activité de la γ-sécrétase.

Ce protocole décrit l’utilisation de l’immunohistochimie pour identifier les régions du locus coeruleus dans des coupes de cerveau de souris. En ciblant la dopamine β-hydroxylase avec des anticorps marqués au fluorophore vert, les neurones producteurs de noradrénaline sont visualisés sous forme de fluorescence verte au microscope.

La vidéo montre le processus d’utilisation d’une sonde de microdialyse pour collecter des protéines extracellulaires du liquide interstitiel (ISF) du cerveau d’une souris. Une sonde de microdialyse, équipée d’une membrane semi-perméable de coupure de haut poids moléculaire, est insérée dans le cerveau d’une souris anesthésiée via une canule guide implantée. La sonde, reliée à des pompes, permet à un tampon physiologique de perfuser le tissu cérébral et de se mélanger à l’ISF. Les protéines de...

Cette vidéo démontre la méthode d’induction d’un stress chronique chez une souris par immobilisation répétée, conduisant à la libération de corticostérone et à une réduction de l’activité des récepteurs du glutamate dans les neurones, ce qui entraîne un comportement semblable à la dépression.

Cette vidéo montre la procédure de préparation et de traitement des hémitranches de cerveau de rat avec un peptide neurotoxique pour imiter la neurodégénérescence. Le protocole permet d’analyser les événements neurodégénératifs en comparant directement les coupes témoins et traitées dans le même plan anatomique.

Cette vidéo démontre l’utilisation de cellules ganglionnaires de la racine dorsale transfectées pour étudier la libération de neurotransmetteurs en les stimulant avec un agoniste des récepteurs neuropeptidiques.

Cette vidéo démontre la coloration immunohistochimique des fibres cholinergiques dans le noyau basal de la région de Meynert de coupes de cerveau de souris. Les sections sont bloquées et traitées avec de l’acétyltransférase primaire contre la choline, suivie d’anticorps secondaires biotinylés. Des complexes avidine-biotine-peroxydase sont ajoutés, qui se lient aux anticorps secondaires, puis au substrat chromogène. Les coupes sont ensuite déshydratées et montées avant d’être visualisées au...

Cette vidéo démontre l’évaluation de l’absorption de la dopamine dans les synaptosomes prélevés dans le cerveau de souris. Il décrit les étapes à suivre pour préparer les synaptosomes à l’absorption de la dopamine via des transporteurs de dopamine, en les traitant avec des concentrations variables de dopamine radiomarquée, en isolant les synaptosomes et en mesurant la radioactivité pour quantifier l’absorption de la dopamine.

Cette vidéo montre la procédure de coloration de tranches de cerveau de rat fixes contenant des interneurones remplis de biocytine. Le protocole comprend l’incubation avec le complexe avidine-biotine (ABC), la coloration avec HRP et substrat chromogène, la préservation des structures avec du tétroxyde d’osmium et l’intégration du tissu dans de la résine pour l’imagerie.

Cette vidéo démontre la détection de la synthèse de l’ARN du récepteur de la sérotonine à l’aide de sondes oligonucléotidiques dans le tissu cérébral du rat affecté par le syndrome sérotoninergique. Le protocole comprend le prétraitement tissulaire, l’hybridation de sondes et la détection enzymatique pour visualiser et quantifier l’expression de l’ARN du récepteur de la sérotonine au microscope.

Dans cette vidéo, une tranche de cerveau cérébelleux de souris a été utilisée pour étudier les interactions synaptiques entre les fibres parallèles, les fibres grimpantes et les cellules de Purkinje, qui sont essentielles au contrôle moteur. La stimulation des fibres grimpantes a induit une dépression à long terme (DLT) dans les cellules de Purkinje, affaiblissant la force synaptique et entraînant une réponse réduite à la stimulation des fibres parallèles.

Cette vidéo démontre la coloration par immunofluorescence d’un cerveau de drosophile transgénique pour l’imagerie unicellulaire des cellules gliales. Le cerveau exprime des protéines ciblées sur la membrane fusionnées avec différentes combinaisons d’épitopes antigéniques sous le contrôle d’un système de recombinase gliale spécifique. Les cerveaux isolés et fixes sont colorés avec des anticorps primaires spécifiques aux épitopes antigéniques, suivis d’anticorps secondaires conjugués aux...

Cette vidéo montre une intervention chirurgicale guidée par stéréotaxie pour l’ablation du cortex auditif chez un rat. Les étapes comprennent l’identification de repères anatomiques chez un rat anesthésié fixé dans un cadre stéréotaxique, la création d’une fenêtre sur le crâne au-dessus du cortex auditif, l’aspiration des couches corticales et la fourniture de soins postopératoires pour évaluer l’impact de l’ablation sur le traitement du son.

Dans cette vidéo, nous décrivons la procédure de coloration par fluorescence à l’aide de la microscopie à fluorescence pour démontrer la coloration à la phalloidine des cellules de la crête neurale cultivées sur des hydrogels de rigidité variable afin de visualiser et d’analyser l’organisation du cytosquelette.

Cette vidéo démontre la réticulation des protéines de surface neuronales à l’aide du subérât de bis-sulfosuccinimidyle ou BS3. Le cerveau de souris isolé et refroidi est sectionné coronalement. La région souhaitée est extraite des sections, hachée et traitée avec BS3. BS3 réticule les protéines de surface comme les récepteurs GABA, laissant les protéines internes inaltérées. La réaction est trempée avec de la glycine avant de traiter les échantillons pour une analyse plus approfondie.

La vidéo présente une technique de mesure de l’absorption du glucose dans les motoneurones larvaires de la drosophile à l’aide d’un capteur de glucose intracellulaire basé sur le transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET). Après avoir disséqué les larves pour exposer le cordon nerveux ventral, les motoneurones sont visualisés à travers la fluorescence émise par le fluorophore donneur du capteur. Lorsqu'il est stimulé par du glucose, le FRET entre les fluorophores donneur et...

Cette vidéo montre la procédure d’immunomarquage d’une section de tissu cérébral de souris fixe avec des astrocytes marqués par fluorescence à l’aide d’anticorps primaires et secondaires et capture les images des astrocytes colorés par microscopie confocale.

Cette vidéo montre comment isoler des cellules de Purkinje d’un tissu cérébelleux humain post-mortem à l’aide de la microdissection par capture laser.

Cette vidéo présente un protocole détaillé, étape par étape, pour la préparation de coupes de tissus cérébraux de souris congelés pour des analyses en aval.

Cette vidéo démontre le développement d’un modèle de culture d’organes pro-inflammatoire et dégénérative pour la maladie du disque intervertébral (DIV) à un stade précoce à l’aide du TNF-α. Il décrit la procédure d’injection de TNF-α dans le disque intervertébral et explique les mécanismes par lesquels le TNF-α induit une inflammation et une dégradation de l’IVD.

Cette vidéo démontre la dissociation de tissu cérébral de rat congelé en une suspension unicellulaire par digestion enzymatique et trituration mécanique. Les cellules préparées sont fixées et perméabilisées à l’éthanol pour des applications en aval telles que la cytométrie en flux ou l’analyse de l’expression génique.

La vidéo montre l’analyse de l’état de palmitoylation de protéines membranaires cellulaires isolées de tissu cérébral de souris. Le processus consiste à exposer les cystéines non palmitoylées et à les bloquer, puis à utiliser un polymère qui se lie aux cystéines palmitoylées, ce qui aide à évaluer l’état de palmitoylation des protéines isolées.

Cette vidéo fait la démonstration d’une méthode de fabrication de microbilles de polymère qui encapsulent des cellules neurotoxiques sécrétant de la bêta-amyloïde. La suspension cellule-polymère est traitée à travers un dispositif de fabrication de microbilles, la gélification du polymère étant obtenue par réticulation du calcium, formant des microbilles sphériques autour des cellules. Le polymère permet la prolifération cellulaire tout en permettant une libération contrôlée et à long terme de...

La vidéo montre une procédure étape par étape pour disséquer symétriquement un cerveau humain post-mortem fixe, en préparant des blocs de tissus plus petits pour une analyse plus approfondie.

Cette vidéo montre la procédure d’évaluation de la capacité de rétention du calcium mitochondrial en surveillant les changements en temps réel de la fluorescence lorsque les mitochondries absorbent le calcium. Ce test est utile pour étudier la fonction mitochondriale et les processus liés au calcium, y compris l’apoptose et les maladies neurodégénératives.

Cette vidéo démontre l’effet de la perfusion continue de médicament dans le cerveau de la souris sur la glycémie. Le métabolisme du glucose est évalué en prélevant du sang sur la queue d'une souris à jeun et en mesurant les niveaux de glucose avant et après l'administration orale de glucose. La tolérance à l’insuline est évaluée en injectant de l’insuline dans la souris, avec des niveaux de glucose enregistrés à des intervalles spécifiques.

Dans cette vidéo, un rat anesthésié subit une procédure oculaire où des billes magnétiques sont injectées dans la chambre antérieure sous un champ magnétique pour bloquer l’angle iridocornéen. Ce blocage obstrue le réseau trabéculaire, empêchant le drainage de l’humeur aqueuse et entraînant une augmentation de la pression intraoculaire, endommageant les cellules ganglionnaires rétiniennes et le nerf optique. Cela développe une affection semblable à celle du glaucome.

Source : Kummari, E., et. al., Microdissection par capture laser - Une démonstration de l’isolement des neurones dopaminergiques individuels et de l’ensemble de l’aire tegmentale ventrale., J. Vis. Exp. (2015)Dans cette vidéo, nous démontrons le protocole d’immunohistochimie pour les neurones dopaminergiques dans les coupes de tissus cérébraux pour la microdissection ultérieure par capture laser.

Source : Bennett, S. A., et al., Caractérisation des altérations de modification post-traductionnelle des histones dans les modèles de protéinopathie neurodégénérative de levure. J. Vis. Exp. (2019). Cette vidéo montre la procédure d’évaluation des modifications des histones dans les cellules de levure surexprimant les protéines neurodégénératives. Les étapes comprennent la lyse cellulaire, la centrifugation, l’électrophorèse, le transfert membranaire et la détection d’histones modifiées à...

Source : Yan, Z., et al. Évaluation de l’effet anti-dépression du Xiaoyaosan sur les souris souffrant de stress chronique. J. Vis. Exp. (2019). La vidéo montre le processus d’établissement d’un modèle murin de dépression chronique induite par le stress et l’évaluation des comportements dépressifs. L’application chronique de divers facteurs de stress déclenche la libération de corticostérone, entraînant une surexcitation neuronale et une mort neuronale éventuelle, ce qui entraîne des symptômes...

Source : Bétemps, D., et al., Détection de la α-synucléine associée à la maladie par ELISA amélioré dans le cerveau de souris transgéniques surexprimant la α-synucléine humaine mutée A53T. J. Vis. Exp. (2015). Cette vidéo montre la procédure de détection de la protéine α-synucléine associée aux maladies neurodégénératives dans le tissu cérébral de souris transgéniques à l’aide d’ELISA. Les étapes comprennent l’homogénéisation des tissus, la centrifugation et la détection ELISA de la protéine...

Source : Wulf, M., et.al. Protocole basé sur la microdissection laser pour l’analyse LC-MS/MS du profil protéomique des granules de neuromélanine. J. Vis. Exp. (2021). Cette vidéo montre l’analyse d’échantillons de peptides à partir de granules de neuromélanine (NMG) isolés dans des tissus cérébraux humains post-mortem. Les peptides sont d’abord séparés par chromatographie liquide à haute performance (HPLC), puis analysés par spectrométrie de masse pour déterminer leur rapport masse/charge...

Source : Zhi, L. et al., Mesure du taux de consommation d’oxygène dans des coupes striatales aiguës de souris adultes. J. Vis. Exp. (2022). Cette vidéo montre comment mesurer le taux de consommation d’oxygène mitochondrial (OCR) dans des tranches de cerveau striatal de souris. Il détaille les étapes de préparation de la plaque de tissu et de la cartouche du capteur, de leur chargement dans l’analyseur de flux et explique les processus cellulaires sous-jacents aux modèles OCR.

Source : Josiah, S. S., et al. Étude des fonctions et des activités du cotransporteur neuronal K-CL KCC2 à l’aide du Western Blot. J. vis. exp. (2022). La vidéo montre les étapes de détection et de quantification de la protéine phosphorylée du cotransporteur 2 du chlorure de potassium (KCC2) dans un lysat cellulaire. Ce processus implique une immunoprécipitation pour isoler KCC2 phosphorylé et une chimiluminescence pour quantifier la protéine isolée.

Source : Lani-Louzada, R., et al. Cautérisation du plexus vasculaire limbique pour le glaucome induit chirurgicalement chez les rongeurs. J. Vis. Exp. (2022). Cette vidéo démontre la quantification des cellules ganglionnaires rétiniennes à partir de rétines de rat fixées chimiquement et soumises à une cautérisation complète du plexus vasculaire limbique. Le processus comprend la perméabilisation, la coloration des anticorps et la contre-coloration nucléaire, suivie d’une visualisation au...

Source : Jensen, V. N., et al. Mesure répétée de l’activité des muscles respiratoires et de la ventilation dans des modèles murins de maladies neuromusculaires. J. Vis. Exp. (2017). Cette vidéo montre la méthode d’enregistrement simultané de signaux de pléthysmographie et d’électromyographie dans un modèle de souris SLA en mouvement libre. La procédure consiste à utiliser des électrodes implantées et un émetteur pour capturer l’activité musculaire, ainsi qu’une chambre de pléthysmographie pour...

Source : Jiang, X., et al. Induction et évaluation d’un modèle murin de myopie expérimentale. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo montre une procédure permettant d’induire la myopie chez une souris grâce à l’installation d’une monture d’objectif personnalisée. La monture est fixée au crâne exposé à l’aide d’un adhésif dentaire, et des lentilles concaves sont insérées pour déplacer le point focal derrière la rétine. Cette configuration stimule l’allongement du globe oculaire conduisant à la myopie.

Source : Jolly, S., et.al. Combinaison de l’hybridation in situ à double fluorescence avec immunomarquage pour la détection de l’expression de trois gènes dans des sections de cerveau de souris. J. Vis. Exp. (2016). Cette vidéo démontre l’utilisation de l’hybridation in situ à double fluorescence pour visualiser l’expression de deux cibles d’ARN dans des coupes de cerveau de souris. Le protocole implique une détection séquentielle de l’ARN à l’aide de sondes marquées à la fluorescéine, à...

Source : Baleriola, J., et. al., Détection d’ARNm localisés axonalement dans des sections de cerveau à l’aide de l’hybridation in situ à haute résolution. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo démontre la détection de l’ARNm dans les axones cholinergiques dans des tranches d’hippocampe de souris fixes à l’aide de l’hybridation fluorescente in situ et de la coloration par anticorps. La microscopie à fluorescence révèle la localisation spatiale des ARNm marqués par sonde et de la choline...

Source : Zhang, J., et al. Analyse quantitative immunogold à haute résolution des récepteurs membranaires au niveau des synapses du ruban rétinien. J. Vis. Exp. (2016)Cette vidéo présente une technique de microscopie électronique pour visualiser la localisation des récepteurs de neurotransmetteurs dans les synapses rétiniennes. Les coupes rétiniennes contiennent des cellules ganglionnaires rétiniennes qui présentent des récepteurs de neurotransmetteurs liés à la membrane et sont marquées avec...

Source : de March, C. A. et. al., Surveillance in vitro en temps réel de l’activation des récepteurs odorants par un odorisant en phase vapeur. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo montre la méthode de surveillance de l’activation en temps réel des récepteurs odorants dans les cellules de mammifères recombinants à l’aide de la mesure de la luminescence. La liaison odorante déclenche l’activation de la protéine G et la production d’AMPc, activant les protéines glocapteurs qui émettent de la...

Source : Alluri, H., et al. Privation et réoxygénation d’oxygène-glucose en tant que modèle de lésion d’ischémie-reperfusion in vitro pour l’étude du dysfonctionnement de la barrière hémato-encéphalique. J. Vis. Exp. (2015). La vidéo démontre la localisation fluorescente des protéines de jonction serrée et des fibres de stress dans les cellules endothéliales microvasculaires du cerveau du rat (RBMEC). Dans la monocouche stressée, des anticorps marqués par fluorescence sont utilisés pour marquer...

Source : Eid, L. & Parent, M. Préparation de tissu cérébral de primates non humains pour l’immunohistochimie et la microscopie électronique avant intégration. J. Vis. Exp. (2017). Cette vidéo montre la préparation de tissu cérébral de primate non humain fixé à l’aldéhyde à l’aide de l’immunohistochimie de pré-intégration pour la microscopie électronique. Il décrit les étapes de l’immunomarquage d’une protéine neuronale spécifique, suivie d’une réaction de peroxydase qui produit un précipité...

Source : Evilsizor, M. N., et. al., Amorce pour l’immunohistochimie sur le tissu cérébral de rat cryosectionné : exemple de coloration pour la microglie et les neurones. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo présente une procédure de coloration immunohistochimique étape par étape sur du tissu cérébral de rat cryosectionné pour visualiser la disposition spatiale de la microglie et des neurones.

Source : Kirchner, K.N., et al., Une méthode hydrophobe de nettoyage des tissus pour le tissu cérébral du rat. J. Vis. Exp. (2020). Cette vidéo montre la méthode d’élimination des tissus hydrophobes d’un échantillon de tissu cérébral de rat. L’échantillon est déshydraté séquentiellement dans du méthanol, traité avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol pour dissoudre les lipides et les pigments, et transféré dans de l’éther dibenzylique pour une clarification complète des tissus,...

Pour détecter ces bactéries, prélevez une section de cerveau humain déparaffinisée, réhydratée et infectée par des bactéries avec des antigènes protéiques exposés et de la phosphatase endogène inactivée.

Le virus infecte les neurones pyramidaux du cortex cérébral et les protéines virales exprimées se localisent dans des structures granulaires intracytoplasmiques appelées corps d’inclusion.

Lavez pour éliminer la paraffine, puis réhydratez le tissu en diminuant les concentrations d’alcool.

Cette vidéo montre l’isolement de protéines de surface cellulaire et intracellulaires à partir d’une culture d’astrocytes. La culture d’astrocytes est placée sur de la glace pour inhiber l’endocytose, puis les protéines de surface cellulaire sont marquées avec un réactif de biotinylation. Les cellules sont lysées pour libérer les protéines biotinylées de surface cellulaire et les protéines intracellulaires non biotinylées. Enfin, des billes enrobées de streptavidine sont utilisées pour séparer...

Cette vidéo montre le processus d’injection intraventriculaire pour étudier la distribution du cytomégalovirus murin (MCMV) dans le cerveau de souris néonatale. La MCMV, conçue pour exprimer une protéine fluorescente verte améliorée (EGFP) pour la visibilité, est injectée dans le ventricule latéral du cerveau d'un bébé souris. Le virus injecté circule dans le liquide céphalo-rachidien, infectant les cellules de la région périventriculaire, y compris la zone marginale, le plexus choroïde et la...

Cette vidéo démontre l’établissement d’un modèle in vitro d’infection par le virus Zika dans un cerveau en développement. Les organoïdes cérébraux humains contenant des rosettes de cellules souches, de cellules progénitrices neurales (NPC) et de neurones sont infectés par le virus Zika. Le virus infecte les PNJ et déclenche l’apoptose, perturbant le développement des organoïdes.

La vidéo démontre la micro-injection de lipopolysaccharides (LPS) dans le cerveau de larves de poisson-zèbre pour induire une neuroinflammation. Les larves sont positionnées sur une boîte tapissée d’agarose, l’aiguille est insérée dans les ventricules cérébraux et le LPS est injecté. Le LPS injecté déclenche une réponse immunitaire qui conduit à une neuroinflammation.

Cette vidéo démontre l’évaluation de la santé mitochondriale dans les astrocytes génétiquement modifiés, qui expriment une protéine fluorescente dans leurs mitochondries. La protéine aide à suivre les changements dans la santé mitochondriale lorsque sa fluorescence passe du vert au rouge, indiquant un stress ou des dommages. Les images sont capturées et analysées à l’aide de différents paramètres.

Cette vidéo montre la procédure d'injection de virus VIH chimériques dans le cortex du cerveau d'un rat, où l'ARN du virus s'intègre dans le génome de l'hôte, se réplique et se propage pour établir une infection active par le VIH dans le modèle expérimental.

Cette vidéo montre la génération d’un modèle de souris avec une infection du SNC. Un chiot allaitant reçoit une injection du virus à la fois par voie intracrânienne et intrapéritonéale. Le virus se propage, infectant le SNC, provoquant la mort des cellules neuronales et l’inflammation. Le chiot est évalué pour détecter les symptômes d’infection à mesure que la maladie progresse.

Cette vidéo démontre la génération de neuroinflammation dans un modèle murin. Une souris anesthésiée avec des micro-plaies est prélevée, et un inoculum de virus de la pseudorage (PRV) est appliqué sur les plaies. Le virus infecte les nerfs périphériques, se propage aux ganglions de la racine dorsale (DRG) et infecte davantage la moelle épinière et le cerveau. L’infection des neurones du système nerveux entraîne une réponse immunitaire qui induit des lésions neuronales, conduisant à une...

La vidéo démontre l’injection intracérébrale d’une suspension du virus Zika chez une souris adulte pour induire une neurodégénérescence. Une souris anesthésiée est fixée dans un cadre stéréotaxique et un trou est percé dans le crâne exposé pour l’injection. Une suspension du virus Zika est injectée dans le tissu cérébral. L’infection virale provoque une inflammation, conduisant à une neurodégénérescence.

Cette vidéo démontre la quantification de la charge bactérienne infectieuse du cerveau de souris perfusé infecté par Listeria monocytogenes.

Cette vidéo présente une méthode pour étudier la perméation à travers un modèle in vitro de barrière hémato-encéphalique (BHE) utilisant des astrocytes et des cellules endothéliales sur un insert membranaire, avec du FITC libre et de la ferritine chargée de FITC. La FITC-ferritine s’est liée aux récepteurs des cellules endothéliales et a traversé la barrière membranaire jusqu’à la chambre inférieure, tandis que la FITC libre a montré une perméation restreinte et est restée dans la chambre...

Cette vidéo montre une procédure permettant d’infecter des cellules souches neurales fœtales humaines avec le virus Zika. Les cellules infectées peuvent être utilisées pour d’autres études.

Cette vidéo présente un modèle in vitro pour étudier les agents pathogènes traversant la barrière hémato-encéphalique (BHE). Les cellules endothéliales microvasculaires, qui expriment des jonctions serrées, forment une couche endothéliale dans la chambre supérieure, tandis que les neurones, les astrocytes et la microglie représentent le parenchyme cérébral dans la chambre inférieure, séparé par une membrane poreuse. L’infection virale dans le modèle de la BHE imite le passage de l’agent...

Source : Funes, S., et. al., Cellules de type microglie humaine : différenciation à partir de cellules souches pluripotentes induites et test de phagocytose in vitro sur cellules vivantes à l’aide de synaptosomes humains. J. Vis. Exp. (2022)Cette vidéo présente un test permettant d’étudier la capacité phagocytaire des cellules microgliales à l’aide de synaptosomes marqués à un colorant fluorescent sensibles au pH.

Plongez le tissu dans du xylène pour dissoudre la paraffine.

Injectez par voie intraveineuse de l’albumine marquée au fluorophore, qui traverse la BHE endommagée et atteint le cerveau.

Le tissu présente des fibrilles amyloïdes et des agrégats de protéines anormaux dans les parois des vaisseaux cérébraux, qui sont des indicateurs clés de troubles neurologiques.

La MCCH se caractérise par une réduction du flux sanguin vers le cerveau. Cela limite l’apport d’oxygène et de nutriments à la couche de cellules endothéliales des vaisseaux sanguins cérébraux, endommageant les cellules.

Suspendez le mélange cellulaire dans une matrice extracellulaire ou une solution ECM.

Faites une incision cervicale pour exposer et ligaturer lâchement les artères carotides communes bilatérales.

Cette vidéo montre la méthode d’induction expérimentale de l’encéphalomyélite auto-immune (EAE) en injectant des peptides dérivés de la myéline avec un adjuvant pour activer les lymphocytes T autoréactifs, qui migrent vers le cerveau. La toxine coquelucheuse est administrée pour augmenter la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique, permettant à ces lymphocytes T et à d’autres cellules immunitaires de pénétrer dans le cerveau. Ces cellules immunitaires provoquent une démyélinisation,...

Cette vidéo présente une procédure d’évaluation de la rupture de la barrière hémato-encéphalique dans un modèle murin EAE. Des colorants fluorescents de différentes tailles sont injectés rétro-orbitaire et circulent dans les vaisseaux sanguins du cerveau. Le plus petit colorant s’échappe par des interstices dans le tissu cérébral, tandis que le plus grand colorant n’y pénètre que si la perturbation est grave, en corrélation avec l’étendue des dommages à la barrière.

Cette vidéo montre une procédure pour induire des lésions tissulaires ou un infarctus dans le pont d’un rat anesthésié à l’aide d’une stimulation électrique.

Dans cette vidéo, des embryons de poisson-zèbre fécondés sont déchoionnés sous un stéréomicroscope, puis exposés à un inhibiteur de la synthèse du cholestérol, entraînant le développement de ruptures de vaisseaux sanguins et d’hémorragies cérébrales chez les larves. Les larves hémorragiques, identifiables par des taches rouges distinctes, sont ensuite séparées au microscope pour une analyse plus approfondie.

Cette vidéo démontre le processus d’induction de la rupture de la barrière hémato-encéphalique (BHE) et de microhémorragies cérébrales dans un modèle de rat à l’aide de lipopolysaccharide (LPS). Il met en évidence la séquence des réponses immunitaires qui conduisent à une perméabilité accrue de la BHE et à des lésions ultérieures des tissus cérébraux.

Cette vidéo présente un test de détection des microhémorragies cérébrales (CMH) dans un modèle de rat. Les CMH sont des hémorragies cérébrales dues à une rupture de la barrière hémato-encéphalique, identifiée par une fuite de globules rouges (GR). Dans un modèle de rat, le tissu cérébral fixe est cryoprotégé, sectionné et coloré à l’hématoxyline-éosine pour les globules rouges, ce qui permet une visualisation microscopique des CMH. Les globules rouges qui fuient apparaissent en rouge-orange au...

La vidéo montre la procédure de création d’un modèle murin pour étudier les lésions cérébrales hypoxiques-ischémiques néonatales. Il décrit les étapes à suivre pour induire chirurgicalement une ischémie et soumettre l’animal à l’hypoxie afin d’exacerber les lésions cérébrales. Enfin, il montre comment évaluer les lésions cérébrales qui en résultent, en s’assurant que le modèle murin est prêt pour une enquête scientifique plus approfondie.

Cette vidéo montre comment caractériser l’espace extracellulaire dans une tranche de cerveau en utilisant des microélectrodes sélectives d’ions et d’ionophorèse pour mesurer et comparer les signaux électriques. Ce processus permet de déterminer la fraction volumique de l'espace et le degré de torsion.

Dans cette vidéo, un réseau de multiélectrodes (MEA) recouvert de glutamate oxydase est implanté dans le tissu cérébral d’une souris anesthésiée. La solution de glutamate est injectée dans l’espace extracellulaire où le MEA détecte les niveaux de glutamate, ce qui permet de surveiller en temps réel l’absorption du glutamate par les astrocytes.

Dans cette vidéo, un bébé souris génétiquement modifié portant le gène Ccm2 flanqué de sites loxP et d’une créase recombinase fusionnée à un récepteur d’œstrogène est utilisé pour induire des malformations caverneuses cérébrales (CCM). L’administration de 4-hydroxytamoxifène active Cre dans les cellules endothéliales, entraînant la délétion de Ccm2 et la formation de CCM dans le cerveau.

Cette vidéo montre la procédure d’isolement des cellules cérébrales et des cellules immunitaires infiltrées des tissus cérébraux ischémiques de souris par digestion enzymatique, suivie de l’élimination des débris cellulaires et de la myéline par centrifugation à gradient de densité, afin d’étudier les réponses inflammatoires dans la recherche sur les accidents vasculaires cérébraux.

La vidéo démontre l’induction de l’hémorragie sous-arachnoïdienne par perforation endovasculaire dans un modèle murin. Une incision est pratiquée dans la région du cou de la souris anesthésiée pour accéder à l’artère carotide commune et à sa bifurcation. Un filament est inséré dans les artères pour perforer une branche artérielle intracrânienne, induisant une hémorragie sous-arachnoïdienne.

Cette vidéo présente une méthode pour générer un modèle d’hémorragie intraventriculaire néonatale chez le rat. Dans cette procédure, un raton anesthésié reçoit une injection d’hémoglobine dans le ventricule latéral du cerveau. L’hémoglobine provoque un stress oxydatif et libère de l’hème, simulant une hémorragie intraventriculaire. Les dommages qui en résultent aux tissus cérébraux, entraînés par des espèces réactives de l’oxygène et des cytokines inflammatoires, entraînent une hypertrophie...

Cette vidéo montre la procédure d’occlusion distale permanente de l’artère cérébrale moyenne, ou MCAO, avec la ligature de l’artère carotide commune, ou ligature CCA, chez des rats âgés pour modéliser l’AVC ischémique. Cela bloque le flux sanguin vers le cerveau, entraînant la mort neuronale et générant un modèle pour étudier les mécanismes de l’AVC et les traitements potentiels.

Cette vidéo montre la procédure d’établissement d’un modèle de rat d’hémorragie sous-arachnoïdienne. Un rat anesthésié est implanté avec des sondes pour mesurer la pression intracrânienne et le débit sanguin cérébral. Le site cible est identifié et l’aiguille est insérée dans une position pré-chiasmatique. Le sang autologue est ensuite injecté dans l’espace sous-arachnoïdien, augmentant la pression intracrânienne et diminuant le flux sanguin cérébral, établissant ainsi le modèle.

Cette vidéo présente une étude expérimentale de la transmigration des lymphocytes à travers un modèle d’endothélium de la barrière hémato-encéphalique (BHE). Une monocouche de cellules endothéliales microvasculaires du cerveau humain (HBMEC) est générée in vitro, et des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) contenant des lymphocytes sont ajoutées à la monocouche. Les cellules sont ensuite incubées pour permettre la transmigration des lymphocytes, et les cellules migrées sont...

Cette vidéo montre l’évaluation de la zone d’infarctus et de l’œdème cérébral dans des coupes de cerveau de rats soumis à une occlusion de l’artère cérébrale moyenne. Les zones infarctus sont identifiées à l’aide de la coloration redox, tandis qu’un filtre bleu et une fonction de seuil dans le logiciel d’analyse d’images quantifient la zone d’infarctus et l’œdème dans l’hémisphère touché.

Cette vidéo présente une méthode d’évaluation de la résistance électrique transendothéliale (TEER) dans les cellules endothéliales microvasculaires du cerveau de souris in vitro. Une valeur TEER élevée indique des jonctions de cellules endothéliales intactes, tandis que l’ajout de cellules T activées abaisse la valeur TEER, reflétant une perturbation de la barrière jonctionnelle.

Cette vidéo montre une procédure de dénervation sympathique de l’artère rénale dans un modèle de souris hypertensive induite par l’angiotensine II, utilisant du phénol pour perturber la fonction nerveuse sympathique et réduire la pression artérielle.

Cette vidéo montre le processus d’induction d’un AVC ischémique dans un modèle de rat en occlusant l’artère cérébrale moyenne (ACM) à l’aide d’un boulon fileté. La procédure consiste à ligaturer les artères carotides, à insérer un boulon fileté dans l’artère carotide externe et à bloquer le flux sanguin de l’ACM vers le cerveau, entraînant la mort neuronale et imitant un accident vasculaire cérébral ischémique.

Cette vidéo montre la procédure de reproduction d’un AVC thrombotique dans un modèle murin en bloquant l’artère carotide commune droite et en exposant la souris à un environnement pauvre en oxygène. Ce processus réduit le flux de sang et d’oxygène vers le cerveau, provoquant la formation de caillots sanguins et des lésions cérébrales.

Cette vidéo démontre la technique précise pour induire un AVC de substance blanche chez une souris anesthésiée en injectant un inhibiteur d’oxyde nitrique à des coordonnées cérébrales ciblées dans la substance blanche. Cela conduit à la constriction des vaisseaux sanguins et à l’inhibition de l’apport sanguin, entraînant des lésions neuronales et un accident vasculaire cérébral.

Source : Wanderer, S., et al. Poche artérielle Modèle d’anévrisme de bifurcation microchirurgicale chez le lapin. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo montre la création d’un modèle expérimental d’anévrisme chez un lapin à l’aide d’une poche vasculaire traitée à l’élastase. Après l’excision d’un segment de l’ACC droit, le sac est traité avec de l’élastase, puis suturé à l’ACC gauche pour rétablir la circulation sanguine. Le stress qui en résulte sur les parois affaiblies de la poche induit la...

Source : Sharma, T. P., et al., Modèle de système autonome translaminaire pour la modulation de la pression intraoculaire et intracrânienne dans les segments postérieurs du donneur humain. J. Vis. Exp. (2020). Cette vidéo montre la procédure de préparation d’un œil humain pour étudier les effets de la pression translaminaire sur la signalisation des cellules ganglionnaires rétiniennes en simulant les pressions intraoculaires et intracrâniennes dans un système autonome translaminaire.

Source : Lani-Louzada, R., et al., Cautérisation circulaire complète du plexus vasculaire limbique pour le glaucome induit chirurgicalement chez les rongeurs. J. Vis. Exp. (2022)Cette vidéo montre l’induction et la surveillance de la pression intraoculaire élevée (PIO) dans un modèle de rat. Le processus consiste à cautériser les vaisseaux sanguins limbiques, ce qui entraîne une occlusion des vaisseaux et une PIO élevée. Le rat est ensuite laissé se rétablir, et la PIO est régulièrement...

Source : Jungen, C., et al. Impact des neurones intracardiaques sur l’électrophysiologie cardiaque et l’arythmogenèse dans un système de Langendorff ex vivo. J. Vis. Exp. (2018). La vidéo fait la démonstration d’une technique ex vivo de stimulation du système nerveux intracardiaque afin d’évaluer la susceptibilité du cœur à l’arythmie. À l’aide d’un appareil de perfusion, un cœur de souris isolé est perfusé avec un tampon oxygéné. Le système nerveux intracardiaque est ensuite stimulé à une...

Source : Hakim, M. A. et al., Isolement et analyse fonctionnelle de l’endothélium artériolaire du parenchyme cérébral de souris. J. Vis. Exp. (2022). Cette vidéo démontre l’analyse fonctionnelle d’un tube endothélial artériolaire isolé du cerveau d’une souris. Il décrit les étapes de mesure des niveaux de calcium intracellulaire et du potentiel membranaire, à la fois au départ et en réponse à une stimulation pharmacologique.

Source : Tang, X. et. al., Hémorragie pontique massive par double injection de sang autologues. J. Vis. Exp. (2021)Ce protocole décrit l’infusion contrôlée de sang autologue dans la région pontique du cerveau d’un rat pour modéliser une hémorragie pontique massive. Le but est de simuler une hémorragie cérébrale localisée en augmentant la pression localisée.

Source : Alluri, H., et.al. Privation et réoxygénation d’oxygène-glucose en tant que modèle de lésion d’ischémie-reperfusion in vitro pour l’étude du dysfonctionnement de la barrière hémato-encéphalique. J. Vis. Exp. (2015).La vidéo démontre l’impact de la privation d’oxygène-glucose et de la réoxygénation ultérieure sur les cellules endothéliales microvasculaires du cerveau du rat (RBMEC) en simulant des conditions hypoxiques et privées de nutriments. Ces conditions entraînent une...

Source : Gucciardo, E., et. al., Un modèle de culture tissulaire ex vivo pour les complications fibrovasculaires dans la rétinopathie diabétique proliférative. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo détaille un protocole d’immunomarquage pour les cultures ex vivo de tissu fibrovasculaire intégré dans du gel de fibrine. Cela permet une visualisation détaillée des changements vasculaires associés à la rétinopathie diabétique...

Source : Talley Watts, L., et al. Photothrombose du Bengale de Rose par imagerie optique confocale in vivo : un modèle d’accident vasculaire cérébral d’un seul vaisseau. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo présente une technique permettant d’induire la formation de caillots sanguins dans le cerveau d’une souris. Une souris anesthésiée avec une fenêtre crânienne et un crâne aminci subit une photothrombose par l’activation d’un colorant photosensible à l’aide d’une lumière de haute intensité. Ce...

Source : Kuts, R. et al. Lésions cérébrales induites par laser dans le cortex moteur des rats. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo montre l’évaluation de l’intégrité de la barrière hémato-encéphalique (BHE) après une lésion cérébrale induite par laser chez des rats. Un colorant de pistage est injecté dans la veine de la queue, ce qui lui permet de circuler vers le cerveau et de s’infiltrer dans les tissus à travers la BHE endommagée. Le cerveau est ensuite extrait et traité pour libérer le colorant.

Les astrocytes sécrètent des molécules de signalisation qui améliorent la maturation et la différenciation des cellules souches en neurones et en astrocytes.

Cette vidéo montre une méthode pour tester la migration des interneurones en réponse à des signaux chimioattractifs provenant de cellules endothéliales périventriculaires (PVEC). Les interneurones sont placés dans un compartiment central, avec des PVEC et des cellules de contrôle de chaque côté. L’augmentation de la migration vers les PVEC indique une réponse positive à leurs signaux chimioattractifs.

Cette vidéo démontre la coloration par immunofluorescence de tranches d’organoïdes cérébelleux pour identifier des antigènes cibles spécifiques exprimés dans divers neurones cérébelleux, qui sont indicatifs de la maturation des organoïdes.

Cette vidéo montre la méthode d’identification des neurones à partir d’une culture mixte de neurones granulaires cérébelleux et de cellules gliales à l’aide d’une double coloration avec du diacétate de fluorescéine (FDA) et de l’iodure de propidium (PI), où les neurones vivants apparaissent en vert et les neurones morts en rouge.

Cette vidéo présente un protocole d’immunomarquage détaillé pour visualiser les défauts phénotypiques dans les corps en champignon des cerveaux de drosophiles mutantes. Le protocole implique l’utilisation d’anticorps contre Fas2, une protéine impliquée dans le guidage axonal qui facilite le bon développement morphologique et fonctionnel du corps du champignon.

Cette vidéo montre la procédure de coloration des cellules souches neurales nouvellement proliférées dans des coupes de tissu cérébral à l’aide de l’incorporation d’EdU, suivie d’une immunofluorescence pour visualiser des protéines spécifiques, améliorant ainsi la compréhension de la dynamique cellulaire et de la prolifération.

Cette vidéo démontre la coloration par immunofluorescence de cryosections de tissus craniofaciaux embryonnaires de souris, en utilisant la microscopie à fluorescence pour évaluer l’expression des marqueurs nucléaires et déterminer la prolifération cellulaire et l’activité de signalisation.

Cette vidéo montre comment les vésicules neuronales sont marquées avec des protéines fluorescentes spécifiques pour visualiser leur mouvement. Tout d’abord, un plasmide codant pour une protéine fluorescente est incubé avec un agent de transfection, puis introduit dans une culture de neurones. Par la suite, des images des neurones sont acquises et analysées pour suivre le mouvement des vésicules.

Cette vidéo montre la mesure de la sécrétion d’acide rétinoïque (AR) à partir des cellules de la neurosphère à l’aide de cellules rapporteures de l’AR. Il décrit les étapes de la co-culture des cellules de la neurosphère avec les cellules rapporteures de la PR et de la réalisation d’un test colorimétrique de la RA pour mesurer les niveaux de PR.

Cette vidéo démontre l’immunocoloration du tractus gastro-intestinal murin embryonnaire pour visualiser et analyser la distribution de la population neuronale à l’aide de l’immunofluorescence et de la microscopie confocale.

Cette vidéo démontre le marquage viral et la transplantation de cellules d’éminence ganglionnaire médiale (MGE) pour des études in vivo. Il décrit les étapes impliquées dans la transduction des cellules MGE avec un rapporteur viral, la transplantation de ces cellules transduites dans le cortex d’un bébé souris et la possibilité de l’expression du rapporteur dans des sous-types spécifiques d’interneurones.

Cette vidéo démontre l’isolement de noyaux riches en récepteurs d’ocytocine dans le cerveau du rat nouveau-né. Le tranchage coronal, suivi de l’identification et du poinçonnage précis des noyaux cérébraux riches en récepteurs de l’ocytocine, permet l’extraction efficace des noyaux riches en récepteurs de l’ocytocine pour une analyse plus approfondie.

Source : Pericoli, G. et. al., Tests d’immunocytochimie de cellules 3D vivantes du gliome diffus pédiatrique. J. Vis. Exp. (2021)Cette vidéo montre l’imagerie de cellules vivantes pour observer la migration diffuse des cellules de gliome médian pédiatrique à l’aide d’un marquage immunohistochimique avec des anticorps anti-CD44.

Source : Jantzie, L. L., et. al. Modélisation de l’encéphalopathie du prématuré à l’aide de l’hypoxie-ischémie prénatale avec lipopolysaccharide intra-amniotique chez le rat. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo présente un protocole permettant d’induire des états hypoxiques-ischémiques et inflammatoires chez les rats fœtaux en limitant le flux sanguin utérin et en injectant du LPS, en modélisant la neuroinflammation et le développement cérébral perturbé pertinent pour les études sur les naissances...

Source : Larpthaveesarp, A., et. al. Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne d’un accident vasculaire cérébral néonatal chez des rats P10. J. vis. exp. (2017)Cette vidéo démontre l’établissement du modèle d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un rat. L’artère carotide interne (ICA) est exposée et une ligature est sécurisée pour limiter l’afflux sanguin. Une occlusion est insérée à travers l’ICA pour atteindre l’artère cérébrale moyenne. Le petit est ensuite laissé...

La maladie déclenche l’attaque des protéines de myéline par des cellules immunitaires autoréactives, dégradant la gaine de myéline entourant les axones neuronaux.

La section de contrôle présente des axones avec des gaines de myéline étroitement tassées contenant des couches concentriques de membrane plasmique. La section blessée présente une myéline décompactée avec de grands espaces.

Le stress altère la fonction des oligodendrocytes, perturbant la gaine de myéline riche en lipides entourant les axones neuronaux du cortex préfrontal médian, une région du cerveau régulant les émotions.

Cette vidéo démontre l’immunoprécipitation de fragments d’ADN réticulés avec la protéine cible à partir de lysats de motoneurones dérivés de cellules souches à l’aide de billes magnétiques recouvertes d’anticorps spécifiques à la protéine cible.

Cette vidéo présente un protocole d’évaluation de l’intégrité structurelle des jonctions neuromusculaires dans les muscles longitudinaux dorsaux de la drosophile. La procédure consiste à colorer les neurones et les muscles avec deux anticorps distincts et à comparer les modèles de fluorescence entre les mouches mutantes et les mouches de type sauvage. Une réduction de la coloration neuronale chez les mouches mutantes indique une neurodégénérescence, tandis que la structure musculaire reste...

Cette vidéo démontre l’évaluation des effets neurodégénératifs d’un produit chimique testé sur Caenorhabditis elegans avec des neurones marqués par fluorescence. Les neurones normaux montrent une fluorescence brillante du soma et des processus intacts, tandis qu’une fluorescence diminuée, un soma gonflé et des processus ponctués indiquent une neurodégénérescence.

Cette vidéo présente une méthode permettant d’établir un modèle de neuropathie à petites fibres chez la souris à l’aide de l’agoniste TRPV1 résinifératoxine (RTX). Il décrit les étapes impliquées dans l’administration de RTX à des souris et explique comment RTX induit la mort neuronale dans des neurones sensoriels de petit diamètre, établissant ainsi le modèle de neuropathie.

Dans cette vidéo, un modèle murin de sclérose en plaques est établi à l’aide d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). On injecte à la souris une émulsion contenant un peptide neuronal et un adjuvant, déclenchant une réponse immunitaire qui active les lymphocytes T autoréactifs. Ceci est suivi d’une injection de toxine coquelucheuse (PTX) pour augmenter la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique, permettant aux lymphocytes T autoréactifs d’infiltrer le cerveau. Cette...

Cette vidéo montre la procédure d’induction de la paralysie par transfert de cellules Th17 activées ciblant l’aquaporine-4 dans un modèle murin. Dans le système nerveux central, les cellules Th17 activées interagissent avec les astrocytes exprimant l’aquaporine-4, déclenchant une réponse immunitaire qui conduit à la paralysie de la queue et des membres chez la souris.

Cette vidéo illustre le processus d’évaluation de la dysfonction motrice dans un modèle murin par l’administration de toxine coqueluche et d’un inoculum contenant des peptides et des adjuvants imitant la myéline, suivie de tests sur tapis roulant pour évaluer la fonction motrice et évaluer les lésions nerveuses résultantes dues à l’activation immunitaire et à la démyélinisation.

Cette vidéo montre le test de l’escalier pour évaluer la fonction motrice chez un rat hémiparkinsonien avec une lésion du cerveau droit. La lésion perturbe la signalisation de la dopamine, ce qui nuit au contrôle de la patte gauche, ce qui entraîne une augmentation du nombre de granulés dans l’escalier gauche, ce qui indique un dysfonctionnement moteur.

Cette vidéo montre l’utilisation d’un test de locomotion radiale pour évaluer le dysfonctionnement moteur chez C. elegans exprimant la protéine TDP-43 humaine de type sauvage ou mutante de la SLA. Les vers avec des niveaux variables d’expression de TDP-43 de type sauvage ou mutant sont autorisés à ramper, et leur mouvement est mesuré par la distance radiale parcourue à partir du point central sur la plaque de test. Le test distingue les déficiences motrices légères, modérées et sévères en...

Cette vidéo démontre l’évaluation du muscle à l’aide de motoneurones cultivés, de cellules de Schwann et de myotubes, suivie d’un traitement avec un bloqueur neuromusculaire pour inhiber la contraction. Les graphiques de mouvement temporel codés en couleur affichent un graphique de mouvement temporel codé en couleur. Le rouge indique le mouvement le plus rapide et le bleu indique le mouvement le plus lent.

Cette vidéo montre la visualisation des interactions protéine-protéine à la jonction neuromusculaire de la drosophile (JNM) à l’aide du test de ligature de proximité (PLA). Après avoir isolé les parois du corps, les protéines en interaction sont sondées avec des anticorps primaires et des anticorps secondaires conjugués au PLA. La proximité des protéines en interaction facilite la ligature des sondes avec des oligonucléotides connecteurs, formant de l’ADN circulaire, qui est ensuite amplifié...

Source : Wagner, K. et al., Étude du trafic de protéines membranaires dans les cellules photoréceptrices de la drosophile à l’aide de protéines marquées eGFP. J. Vis. Exp. (2022). Cette vidéo montre la visualisation du trafic des protéines membranaires dans les cellules photoréceptrices de la drosophile à l’aide de protéines TRPL marquées eGFP. Il détaille la préparation des mouches transgéniques pour l’imagerie, la capture d’images de fluorescence des cellules photoréceptrices et la...

Source : Deseure, K., et al. Lésion de constriction chronique du nerf infra-orbitaire du rat (IoN-CCI) pour étudier la douleur neuropathique du trijumeau. J. Vis. Exp. (2015). Cette vidéo démontre une méthode pour induire une douleur neuropathique dans un modèle de rat en contractant le nerf infra-orbitaire. Après avoir exposé le nerf infra-orbitaire et attaché des ligatures pour le resserrer, la réponse immunitaire au site de la blessure augmente l’excitabilité des neurones voisins, qui...

Source : Brakkee, E. M., et al. Chirurgie et tests comportementaux dans le modèle de transposition du névrome tibial chez le rat. J. Vis. Exp. (2023). Cette vidéo montre une procédure permettant de générer un modèle de transposition de neurinome tibial (TNT) de rat. Après avoir exposé le nerf tibial dans la patte arrière d’un rat anesthésié, transectez le nerf. Ensuite, créez un tunnel sous-cutané, enfilez le nerf sectionné dans le tunnel et suturez-le en place. En l’absence d’une cible pour la...

Source : Lee, D. et. al., Conditions expérimentales modifiées pour la perte auditive induite par le bruit chez la souris et évaluation de la fonction auditive et des lésions des cellules ciliées externes. J. Vis. Exp. (2023)Cette vidéo montre la procédure de perte auditive induite par le bruit chez la souris. Un son de volume élevé endommage les cellules ciliées de l’oreille interne et perturbe les voies auditives, entraînant une déficience auditive.

Source : Lee, D., et. al. Conditions expérimentales modifiées pour la perte auditive induite par le bruit chez la souris et évaluation de la fonction auditive et des lésions des cellules ciliées externes. J. vis. exp. (2023)Cette vidéo montre la mesure de la réponse auditive du tronc cérébral (ABR) chez une souris. Les électrodes sont placées sur la tête, derrière l’oreille et près de la queue d’une souris anesthésiée. Des stimuli acoustiques de différentes intensités sont délivrés et les...

Source : Olmstead, D. N., et al., Axotomie du nerf facial chez la souris : un modèle pour étudier la réponse des motoneurones aux blessures. J. Vis. Exp. (2015). Cette vidéo montre la procédure d’écrasement du nerf facial chez une souris, où la dissection contondante à travers des points de repère clés expose le tronc du nerf facial au niveau du foramen stylomastoïdien. Les forceps sont ensuite utilisés pour comprimer le tronc nerveux, induisant des lésions axonales et perturbant la...

Source : Cheah, M., et al. Injection du ganglion de la racine dorsale et blessure par écrasement de la racine dorsale comme modèle de régénération sensorielle des axones. J. Vis. Exp. (2017). Cette vidéo montre une procédure étape par étape pour injecter une suspension virale dans les ganglions de la racine dorsale (DRG) et induire une lésion axonale contrôlée via un écrasement de la racine dorsale chez un rat anesthésié. Le protocole consiste à exposer les DRG, à délivrer un vecteur viral...

Pour détecter la mort cellulaire apoptotique à l’aide du test TUNEL, traitez la tranche de cerveau avec l’enzyme protéinase-K.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, visualisez le nerf blessé, qui présente une augmentation progressive des gonflements et des déconnexions axonaux.

L’encapsulation du médicament améliore la spécificité des cellules tumorales et réduit la neurotoxicité.

Cette vidéo démontre l’administration de lésions cérébrales traumatiques (TCC) chez la souris. Après avoir exposé le crâne, le site du TCC est marqué. La souris est ensuite positionnée sous le dispositif TBI. L’impact est délivré en soulevant la tige métallique et en la laissant tomber librement sur l’impacteur, qui est en contact avec le crâne.

Cette vidéo démontre la coloration par immunofluorescence de neurones de l’hippocampe de rat cultivés dans une puce microfluidique pour analyser la maturation et la connectivité neuronales.

Cette vidéo démontre la génération d’un modèle de lésion neuronale dans les neurones primaires du granule cérébelleux de souris. Il décrit les étapes impliquées dans l’induction de lésions neuronales à l’aide de NMDA, un agoniste des récepteurs de neurotransmetteurs excitateurs, et de glycine, un co-agoniste. Le NMDA et la glycine se lient à des récepteurs neuronaux spécifiques, provoquant leur surstimulation et entraînant un afflux massif de calcium intracellulaire, ce qui entraîne des...

Cette vidéo démontre la coloration par immunofluorescence d’une tranche de cerveau de souris pour quantifier la distribution d’une protéine présynaptique spécifique. Le processus implique le blocage de sites non spécifiques, l’application d’anticorps primaires pour la protéine cible et d’un marqueur de référence, suivie d’un marquage secondaire des anticorps et d’une contre-coloration nucléaire. Le marqueur de référence assure une quantification précise en fournissant une base de référence...

Cette vidéo présente une méthode permettant d’étudier les lésions cérébrales des larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie électronique à transmission à balayage (STEM) à grande échelle, une technique qui combine des éléments de la microscopie électronique à balayage (MEB) et de la microscopie électronique à transmission (MET) pour produire des images à haute résolution. Il décrit les étapes de la préparation des échantillons et de l’acquisition d’images STIM à haute résolution pour...

Cette vidéo présente un protocole chirurgical sur un modèle de rat, détaillant les étapes allant de la préparation de l’anesthésie à l’induction d’une lésion du nerf facial. Ce protocole est utile pour l’étude de la régénération nerveuse et des techniques chirurgicales dans la recherche médicale.

Cette vidéo montre la procédure pour induire une lésion cérébrale traumatique du crâne ouvert chez une souris en pratiquant une incision sur la ligne médiane du crâne, en perçant le crâne et en retirant le lambeau osseux pour exposer le cortex cérébral, et en appliquant une pression élevée pour induire un traumatisme. La plaie est ensuite suturée pour préparer le modèle murin aux expériences ultérieures.

Cette vidéo montre la procédure d’induction de la mort cérébrale dans un modèle murin en augmentant la pression intracrânienne contrôlée à l’aide d’un cathéter à ballonnet, imitant la mort cérébrale naturelle.

Cette vidéo montre une procédure permettant de générer des lésions cérébrales précises et contrôlées dans le cortex moteur du rat à l’aide d’un laser.

Cette vidéo démontre la biotinylation et le marquage fluorescent des sialoglycoprotéines modifiées dans les cellules souches neurales primaires et les cellules progénitrices, ainsi que dans les neurones, et leur visualisation à l’aide de la microscopie à fluorescence.

Dans cette vidéo, un dispositif à tube de choc est utilisé pour générer une onde de choc en rompant un diaphragme en polymère par pressurisation contrôlée. L’onde de choc impacte les tranches de cerveau contenues dans un sac sécurisé, induisant des lésions traumatiques à la tranche de cerveau.

Cette vidéo montre la procédure de préparation des neurones en culture pour l’analyse optique des vésicules synaptiques recyclées. Le processus implique le marquage par fluorescence des protéines des vésicules synaptiques et l’immunomarquage pour marquer et visualiser les vésicules recyclées dans les neurones.

Cette vidéo démontre le processus d’induction de lésions d’étirement sur les neurones dérivés de cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPSCN). Les cellules sont prélevées dans une plaque multi-puits sans fond avec une membrane de silicone attachée. Une contrainte mécanique contrôlée est appliquée sur la membrane pour induire une perturbation cytosquelettique et des dommages à la membrane cellulaire, induisant un phénotype de lésion par étirement dans les cellules.

Cette vidéo montre une procédure permettant d’infliger une blessure traumatique à la tête fermée à des mouches drosophiles anesthésiées à l’aide d’un dispositif de frappe avec un impacteur propulsé par gaz. La blessure affecte la fonction neuronale et altère la capacité de marche.

Cette vidéo montre la procédure de blessure corticale par arme blanche chez la souris, impliquant l’exposition du crâne et la création de lésions cérébrales. Il induit l’astrogliose réactive, une réponse neuroprotectrice des astrocytes, pour étudier les traumatismes, l’inflammation et les mécanismes de réparation du SNC.

La vidéo présente une méthode pour générer un modèle murin de lésion cérébrale traumatique (TCC) à l’aide d’un dispositif à percussion fluide latérale (LFPI). Lors de l’anesthésie de la souris, le cerveau est exposé en créant une fenêtre sur le crâne. Une canule remplie de solution saline est fixée à la fenêtre et est ensuite reliée au LFPI. Le pendule de l’appareil est relâché pour créer une impulsion de pression qui inflige une lésion cérébrale traumatique.

Cette vidéo montre la procédure d’induction d’un traumatisme crânien (TCC) dans un modèle murin. Une souris anesthésiée avec le crâne exposé est prélevée pour créer une ouverture dans le crâne, puis une lésion corticale contrôlée est induite à l’aide d’un dispositif d’impact. La blessure endommage le tissu cérébral, entraînant une altération de la fonction cognitive et de la coordination motrice.

Cette vidéo montre la procédure chirurgicale pour effectuer une hémisection de la moelle épinière thoracique chez le rat. Il décrit les étapes à suivre pour exposer le segment T8 de la moelle épinière, effectuer l’hémisection pour perturber les voies neurales d’un côté et fournir des soins postopératoires.

Cette vidéo montre une méthode permettant d’induire des lésions neuronales ciblées chez les larves de drosophile à l’aide d’un laser de haute puissance. Après avoir positionné la larve au microscope, un laser de faible puissance recherche des neurones fluorescents, puis la puissance du laser est augmentée pour induire des dommages localisés. La blessure est confirmée par une fluorescence accrue et un cratère sur le site de la blessure.

La vidéo montre l’utilisation d’un dispositif de traumatisme à fort impact (HIT) pour induire un traumatisme crânien fermé (TCC) chez Drosophila. Les traumatismes crâniens provoquent des traumatismes cérébraux mécaniques qui affectent la fonction neuronale, ce qui, au fil du temps, conduit à la neurodégénérescence et à la mortalité.

Cette vidéo démontre l’induction d’une lésion cérébrale traumatique pénétrante dans le cerveau de la drosophile. Les mouches nouvellement émergées sont sélectionnées, anesthésiées et positionnées sous un stéréomicroscope équipé d’une fluorescence. Le corps du champignon exprimant la GFP est identifié et une goupille Minutien est insérée pour causer des blessures. Les mouches sont autorisées à se rétablir pour des études plus approfondies.

Source : Shandra, O. et al., Inducing Post-Traumatic Epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury. J. Vis. Exp.

Cette vidéo montre l’induction d’un traumatisme crânien chez un rat à l’aide d’un dispositif de lésion à percussion fluide latérale (FPI). La procédure consiste à créer un trou dans le crâne d’un rat anesthésié pour exposer la dure-mère, sur laquelle une canule est fixée. Le rat est ensuite connecté à l’appareil, qui génère une onde de pression qui atteint le cerveau, imitant les traumatismes crâniens en provoquant la mort des cellules neurales et des lésions...

Source : Yang, Z., et.al. Un modèle de traumatisme crânien répétitif chez la souris. J. Vis. Exp. (2016). Cette vidéo montre l’induction de commotions cérébrales répétitives chez une souris à l’aide d’un dispositif d’impact électromagnétique. La procédure consiste à positionner l’embout d’impact entre les sutures interfrontales et lambdoïdes sur le crâne d’une souris anesthésiée et à utiliser l’embout d’une sonde pour régler avec précision la profondeur de l’impact. L’impact est émis à une...

Source : Logsdon, A. F., et al. Modèle d’onde de souffle de faible intensité pour l’évaluation préclinique des lésions cérébrales traumatiques légères à tête fermée chez les rongeurs. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo démontre l’induction d’une lésion cérébrale traumatique légère à tête fermée dans un modèle murin à l’aide d’une configuration de tube de choc à gaz sous pression. L’onde de pression générée rompt la membrane de polyester, délivrant une onde de choc à la tête de la souris qui...

Source : Macheda, T., et. al. Modèle à tête fermée contrôlé électromagnétiquement de lésions cérébrales traumatiques légères chez la souris. J. Vis. Exp. (2022)Cette vidéo montre la procédure pour induire une blessure à la tête fermée dans un modèle de souris à l’aide d’un cadre stéréotaxique. L’impact contrôlé reproduit une lésion cérébrale traumatique légère, permettant aux chercheurs d’étudier les effets neurologiques et la récupération en mesurant les réflexes et le comportement après une...

Source : Elzat, E. Y. Y., et al., Établissement d’un modèle de lésion de la moelle épinière chez la contusion chez la souris basé sur une technique mini-invasive. J. Vis. Exp. (2022). Cette vidéo montre la méthode d’induction d’une lésion de contusion au niveau de la moelle épinière T9 dans un modèle murin, à l’aide d’une plate-forme coaxiale de lésion de la moelle épinière. Un poids est lâché sur la moelle épinière au niveau T9 qui crée une contusion qui provoque immédiatement une décoloration...

Source : Lakshman, N., et al. Un test de la neurosphère pour évaluer l’activation des cellules souches neurales endogènes dans un modèle murin de lésion minime de la moelle épinière. J. Vis. Exp. (2018). Cette vidéo démontre l’activation et la migration des cellules souches neurales (NSC) dans un modèle de lésion de la moelle épinière chez la souris. Pour exposer la moelle épinière, une vertèbre de la région thoracique de la colonne vertébrale est retirée d’une souris anesthésiée. Une lésion...

Source : Kumar, S., et. al. Modèle murin d’escarres après une lésion de la moelle épinière. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo montre une induction détaillée de lésions de la moelle épinière chez la souris. La souris anesthésiée est disséquée pour exposer les vertèbres T9-T10, et leurs apophyses épineuses sont retirées. La moelle épinière exposée est ensuite transectée pour infliger la blessure. La zone chirurgicale est alors fermée et la souris est laissée récupérer.

Cette vidéo présente une méthode permettant d’évaluer l’internalisation des protéines cibles dans les astrocytes corticaux de souris à l’aide de la biotinylation, suivie de la lyse cellulaire, de l’extraction des protéines à base de streptavidine, de la dénaturation et de l’analyse par transfert Western pour confirmer la réussite de l’internalisation.

Cette vidéo présente une méthode permettant d’évaluer l’activité des protéines à l’aide des neurones de l’hippocampe sur des zones protéiques à motifs. Les neurones présentent une répulsion dans les zones protéiques testées et une fixation dans les zones protéiques témoins, mettant en évidence les effets de l’activité protéique attractive ou répulsive.

Cette vidéo démontre l’induction du glaucome chez un rat anesthésié en injectant une solution saline hypertonique dans la veine épisclérale. La solution saline pénètre dans le réseau trabéculaire via le canal de Schlemm, provoquant des cicatrices tissulaires, ce qui bloque l'écoulement de l'humeur aqueuse et augmente la pression intraoculaire. La pression élevée endommage les cellules ganglionnaires de la rétine, entraînant un glaucome.

Homogénéisez le tissu à l’aide d’un homogénéisateur pour libérer des protéines, y compris l’acide glutamique décarboxylase, ou les isoformes de l’enzyme GAD, essentielles au fonctionnement du cerveau.

Cette vidéo montre la procédure d’accès chirurgical au nerf optique chez un animal anesthésié et d’administration précise de lysolécithine pour induire une démyélinisation focale, créant ainsi des conditions neuropathologiques pour une étude plus approfondie.

Incuber la tranche dans un LCR contenant de faux neurotransmetteurs fluorescents ou FFN.

Cette vidéo montre l'induction de convulsions induites par la manipulation chez une souris infectée par le virus de l'encéphalomyélite murine de Theiler (TMEV). La souris infectée, qui a des neurones hyperexcitables, est exposée à des stimuli physiques externes. Cette exposition provoque du stress, entraînant une activité électrique anormale dans les neurones, ce qui entraîne des convulsions.

Cette vidéo montre la procédure permettant d’induire des crises induites par la chaleur chez une souris transgénique présentant des mutations génétiques liées à l’épilepsie en augmentant progressivement la température corporelle dans une chambre contrôlée. Ce protocole est utilisé pour étudier les mécanismes convulsifs et les thérapies potentielles de l’épilepsie.

Cette vidéo démontre l’induction d’événements ictaux dans des coupes corticales coronales d’une souris transgénique exprimant des canaux cationiques activés par la lumière dans les neurones pyramidaux excitateurs corticaux. La tranche est placée dans une chambre d’enregistrement et une électrode d’enregistrement est insérée dans la couche corticale superficielle. Lors de la perfusion avec un médicament provoquant des crises d’épilepsie qui bloque les canaux potassiques, les neurones deviennent...

Cette vidéo démontre le processus d’induction de l’épilepsie chez la souris à l’aide d’injections de pentylènetétrazole (PTZ), un antagoniste des récepteurs GABA-A. L’administration intrapéritonéale répétée de PTZ abaisse progressivement le seuil de crise en inhibant l’afflux d’ions chlorure, en perturbant la neurotransmission inhibitrice et en conduisant à une hyperexcitabilité dans les neurones qui déclenchent les crises. Ce processus entraîne l’allumage et le développement de crises...

Source : Soukupová, M., et al. Microdialyse des acides aminés excitateurs lors d’enregistrements EEG chez des rats se déplaçant librement. J. Vis. Exp. (2018)Cette vidéo montre l’évaluation des niveaux de neurotransmetteurs excitateurs extracellulaires chez des rats atteints d’épilepsie chronique. Après l’implantation d’une sonde de microdialyse dans le cerveau et la confirmation de l’absence de convulsions à l’aide de l’électroencéphalographie (EEG), du liquide extracellulaire est prélevé pour...

Source : Schönherr, S., et. al. Immunomarquage combiné de l’optogénétique et de la réplique de congélation-fracture pour examiner l’arrangement spécifique à l’entrée des récepteurs du glutamate dans l’amygdale de la souris. J. vis. exp. (2016)Cette vidéo démontre l’immunomarquage de répliques de tissu cérébral de souris fracturées par congélation pour la microscopie électronique. Les répliques fracturées et enrobées sont digérées pour exposer les récepteurs. Des anticorps primaires et...

Dans cette vidéo, des cellules de glioblastome et de microglie sont mélangées à une solution de matrice polymère et transférées dans une chambre poreuse où un gel se forme, intégrant les cellules. La microglie stimule la migration des cellules de glioblastome à travers l’insert poreux, imitant l’invasion des cellules tumorales dans les tissus environnants, les cellules sont ensuite fixées et préparées pour une analyse plus approfondie.

Dans cette vidéo, une méthode est démontrée pour permettre le transfert de mitochondries marquées par fluorescence dans des cellules souches de glioblastome (GSC) par centrifugation. L’absorption réussie et l’intégration fonctionnelle des mitochondries du donneur sont confirmées par la détection de la fluorescence à l’aide de la microscopie confocale.

Source : Guyon, J., et al. Un modèle sphéroïde 3D pour le glioblastome. J. Vis. Exp. (2020)La vidéo démontre la génération d’un modèle sphéroïde tridimensionnel de l’invasion des cellules tumorales. Les sphéroïdes sont formés à partir de cellules tumorales du cerveau humain et intégrés dans une matrice de collagène. Les cellules tumorales à la périphérie des sphéroïdes adoptent un phénotype invasif, sécrétant des protéases pour dégrader le collagène et progressant pour envahir la matrice...

Source : Lim, M., et al. Modélisation des métastases cérébrales par injection de cellules cancéreuses dans l’artère carotide interne. J. Vis. Exp. (2022)Dans cette vidéo, une souris anesthésiée subit une intervention chirurgicale au cours de laquelle des cellules cancéreuses sont injectées dans l’artère carotide commune (ACC) pour faciliter l’administration ciblée au cerveau. La procédure implique une suture précise et une manipulation des artères carotides pour diriger les cellules injectées...

Source : Ear, P. H., et. al. Etablissement et caractérisation des sphéroïdes tumoraux neuroendocriniens de l’intestin grêle. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo démontre la coloration par immunofluorescence des sphéroïdes tumoraux neuroendocriniens de l’intestin grêle. Les sphéroïdes sont fixés, perméabilisés et bloqués, puis sont incubés avec des anticorps primaires et secondaires. Un colorant est ajouté pour colorer les noyaux avant de les monter et de les visualiser au microscope fluorescent.

Source : Mudduluru, G., et. al. Mesure en temps réel de la migration et de l’invasion des cellules cancéreuses basée sur l’impédance. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo présente un test basé sur l’impédance pour mesurer l’invasion et la migration des cellules de glioblastome. Les cellules dégradent la matrice extracellulaire, se déplacent à travers des membranes microporeuses et adhèrent aux électrodes, générant ainsi de l’impédance. Cette analyse en temps réel reflète leur potentiel invasif pour...

Source : Bolcaen, J., et. al., Irradiation guidée par TEP et IRM d’un modèle de rat glioblastome à l’aide d’un micro-irradiateur. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo montre la procédure d’établissement d’un modèle de glioblastome chez le rat en injectant stéréotaxiquement des cellules de glioblastome causant une tumeur cérébrale dans le cortex préfrontal.

Source : Mendez, F. M. et al., Immunoprécipitation native de la chromatine à l’aide de neurosphères de tumeurs cérébrales murines. J. Vis. Exp. (2018). Cette vidéo démontre l’isolement de complexes protéine-ADN à partir de cellules de la neurosphère dérivées d’une tumeur cérébrale de souris à l’aide de l’immunoprécipitation native de la chromatine. Il détaille les étapes de préparation de la chromatine, d’immunoprécipitation, de lavage et de digestion des protéines afin de libérer l’ADN pour...

Source : Núñez, F. J., et al. Évaluation des biomarqueurs dans le gliome par immunohistochimie sur des cultures de gliome 3D de la neurosphère intégrées à la paraffine. J. Vis. exp. (2019). Cette vidéo fait la démonstration d’une technique immunohistochimique pour le marquage de biomarqueurs tumoraux dans les neurosphères tumorales cérébrales intégrées à la paraffine. Les sections de la neurosphère subissent une élimination de la paraffine et une réhydratation, suivies d’un traitement visant à...