Génération d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin

Abstract

Source : Tietz, S. M. et al. Visualisation de l’altération des barrières endothéliale et gliale de l’unité neurovasculaire au cours de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale in vivo. J. Vis. Exp.(2019)

Cette vidéo montre la méthode d’induction expérimentale de l’encéphalomyélite auto-immune (EAE) en injectant des peptides dérivés de la myéline avec un adjuvant pour activer les lymphocytes T autoréactifs, qui migrent vers le cerveau. La toxine coquelucheuse est administrée pour augmenter la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique, permettant à ces lymphocytes T et à d’autres cellules immunitaires de pénétrer dans le cerveau. Ces cellules immunitaires provoquent une démyélinisation, entraînant une altération de la transmission nerveuse et le développement de l’EAE.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Induction EAE

1. Anesthésie les souris C57BL/6 avec de l’isofluorane à l’aide d’un système de vaporisation. Pour induire l’anesthésie chez la souris, exposez la souris à 4,5 % d’isofluorane dans de l’oxygène dans une petite chambre d’incubation avant de transférer la souris sur un masque facial avec 2,1 % d’isofluorane. Utilisez un appareil d’anesthésie équipé d’un coussin chauffant pour prévenir l’hypothermie de la souris.
2. Fixez la souris anesthésiée dans une main et injectez d'abord 30 μL de glycoprotéine d'oligodendrocyte de myéline (MOG)-peptide aa_35-55 (MOG_35-55)/émulsion complète de l'adjuvant de Freund (CFA) par voie sous-cutanée dans les flancs de la patte arrière (Figure 1 : 1 + 2 ; au total 60 μL ; flanc gauche 30 μL et flanc droit 30 μL) à proximité des ganglions lymphatiques inguinaux.
3. Placez la souris sur son ventre et injectez 20 μL d’émulsion MOGaa_35-55/CFA dans les tissus adipeux mous gauche et droit au niveau de la racine de la queue (Figure 1 : 3 + 4 ; au total 40 μL ; racine de la queue du côté gauche 20 μL et racine de la queue du côté droit 20 μL) et une petite gouttelette d’émulsion MOGaa_35-55/CFA dans le cou de la souris (Figure 1 : 5).
4. Injecter 100 μL de solution de toxine coquelucheuse (PTx) par voie intrapéritonéale dans la souris. Tenez la tête de la souris sous le centre du corps pour éviter l'injection dans l'intestin.
5. Remplacer le régime d’entretien (principaux nutriments extrudés : protéines brutes 18,5 % ; matières grasses brutes 4,5 % ; fibres brutes 4,5 % ; cendres brutes 6,5 % ; amidon 35 % ; énergie métabolique : 13,1 MJ/kg) par la ration de reproduction (nutriments majeurs extrudats : protéines brutes 23,5 % ; matières grasses brutes 5,5 % ; fibres brutes 3 % ; cendres brutes 5,7 % ; amidon 36 % ; énergie métabolique : 14,3 MJ/kg) afin de fournir aux souris des aliments à plus forte teneur énergétique avant et pendant la maladie clinique attendue.
6. Retirez le masque facial et transférez la souris dans sa cage d’accueil avec un coussin chauffant. Après 10 minutes, assurez-vous que la souris est complètement éveillée et en mouvement.
7. Répétez l’injection de PTx (étape 1.4) 48 heures après le premier traitement.

2. Score des souris EAE

1. Vérifiez l’état de santé des souris EAE tous les matins en jetant un coup d’œil à l’intérieur des cages.
2. Évaluez les souris EAE tous les après-midi.
3. Sortez chaque souris incluse dans l’expérience EAE de la cage et vérifiez si la queue a du tonus en la déplaçant vers le haut avec un doigt. Une souris en bonne santé gardera sa queue en l’air (la queue a un tonus). Si l’EAE clinique a commencé, le tonus de la queue sera plus bas, visible par une chute progressive de la queue. Finalement, la souris ne pourra plus du tout lever la queue.
4. Placez chaque souris incluse dans l’expérience EAE sur le banc propre et observez et documentez le comportement de marche. Voir le tableau 1 pour les critères de notation pour l’évaluation de la gravité de la maladie (score EAE).
5. Évaluez et documentez le poids de chaque souris incluse dans l’expérience.
6. Pour assurer une absorption adéquate de la nourriture et de l’eau par les souris affichant un score clinique EAE de 1, fournissez de la nourriture humidifiée dans un plat en plastique au fond de la cage et rafraîchissez-la quotidiennement.

Results

Figure 1 : Représentation graphique des sites d’injection pour l’induction de l’EAE. 1) Site d’injection pour l’émulsion MOG de 30 μL dans le flanc droit, 2) site d’injection pour l’émulsion MOG de 30 μL dans le flanc gauche, 3) site d’injection pour l’émulsion MOG de 20 μL dans la racine de la queue gauche, 4) site d’injection pour l’émulsion de MOG de 30 μL dans la racine de la queue droite,...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nourriture d’élevage	par exemple PROVIMI KLIBA SA	Référence 3336
Cages ventilées individuellement, ligne bleue de type II ou III	par exemple Tecniplast	1145T, 1285L
Souris femelles C57BL/6J (8-12 semaines)	par exemple Janvier Labs		Femelles, 8-12 semaines
Aiguille d'injection 18G x 11/2'' (1,2 mm x 40 mm)	par exemple BD, BD Microlance 3	304622
Aiguille d'injection 27G x 3/4'' – Nr. 20 (0,4 mm x 19 mm)	par exemple BD, BD Microlance 3	Référence 302200
Aiguille d'injection de 30 g x 1/2 po (0,3 mm x 13 mm)	par exemple BD, BD Microlance 3	Référence 304000
Adjuvant de Freund incomplet (IFA)	par exemple Santa Cruz Biotechnology	SC-24648	Conserver à 4°C
Alimentation d’entretien	par exemple PROVIMI KLIBA SA	Référence 3436
Peptide MOGaa35-55	par exemple GenScript		Conserver à -80 °C
Mycobacterium tuberculosis H37RA	par exemple BD	231141	Conserver à 4 °C
NaCl 0,9 %	B. Braun	3535789
Omnican 50 30G x 1/2''	B. Braun	Référence 9151125S
Toxine coqueluche	par exemple, List biological laboratories, Inc.	180	Conserver à 4 °C
Ciseaux à coudre	F.S.T	Référence 15012-12
Seringue 1 ml	par exemple PRIMO	Référence 62.1002
Seringue 10 ml	par exemple CODAN Medical ApS	2022-05