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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Injection du nerf optique
- Anesthésier l’animal par une injection intrapéritonéale de kétamine (75 mg/kg) et de médétomidine (0,5 mg/kg).
note: Suite à l’induction de l’anesthésie, observez les réflexes de retrait (test de pincement, réflexe cornéen et palpébral, etc.) et leur absence comme indication pour débuter la chirurgie. Surveiller continuellement les animaux tout au long de la chirurgie et administrer l’anesthésique supplémentaire (10 % de la dose initiale de kétamine par supplément) si les réflexes sont présents. Des rats adultes (>12 semaines) sont utilisés dans les expériences.
- Rasez la peau de la zone chirurgicale. Placez l’animal sur un coussin chauffant (37 °C) pour maintenir la température corporelle pendant la chirurgie. Préparez la peau par l’application topique de povidone iodée. Appliquez un drapé chirurgical. Appliquez une pommade ophtalmique topique pour prévenir la sécheresse cornéenne sous anesthésie générale. Maintenir l’asepsie à l’aide d’instruments stériles.
- Faites une incision de 1 à 1,5 cm dans la peau au-dessus de l’orbite d’un œil choisi au hasard. Ouvrez le tissu sous-cutané pour atteindre la cavité orbitaire à l’aide de fines ciseaux à iris. Ouvrez la conjonctive et la capsule de Tenon antérieure sous le microscope opératoire.
- Rétracter les muscles extraoculaires et les glandes lacrymales intraorbitaires pour exposer une longueur d’environ 3 mm du nerf optique. Ouvrez les couches de dure-mère et de matière arachnoïdienne autour du nerf optique longitudinalement à l’aide d’une lame ophtalmique.
- Insérez la pipette en verre dans le nerf optique à une distance de 2 mm en arrière du globe. La micropipette en verre est attachée à une seringue Hamilton.
- Injectez lentement de la lysolécithine à 1 % (0,4 à 1,0 μl, avec 0,02 % de bleu d'Evan qui n'a pas d'effets sur la myélinisation) lentement dans le nerf sur une période d'environ 30 secondes.
- Suturez l’incision cutanée. Appliquez une pommade antibiotique pour prévenir l’infection. Les autres yeux peuvent servir de contrôles internes pour les enregistrements électrophysiologiques.
- Placez les animaux sur un coussin chauffant pour récupérer de l’anesthésie.