Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Anesthésie et préparation
- Placez l’animal dans la chambre d’anesthésie et induisez une anesthésie générale via 1,8 % d’isoflurane et 0,9 L/min d’oxygène.
- Confirmer un plan d'anesthésie adéquat via une évaluation de la respiration spontanée et une évaluation de la conscience en évaluant la réponse de la grimace de l'animal à un pincement de l'orteil.
- Appliquez le lubrifiant pour les yeux deux fois pour vous protéger contre l’irritation ou la sécheresse de la cornée.
- Rasez le(s) site(s) opératoire(s) avec un rasoir ou une tondeuse automatique.
- Établissez une méthode d’identification des rats à ce moment-là, soit au moyen d’une étiquette d’oreille ou d’une étiquette ou d’un marquage de la queue.
- Administrer une injection sous-cutanée de 0,05 mg/kg de buprénorphine le long du dos de l'animal pour la prophylaxie contre la douleur postopératoire.
2. Approche chirurgicale et types de blessures
- Transférez l’animal sur la table d’opération et continuez le flux de gaz via un cône de nez. Assurez-vous qu’un coussin chauffant est placé sous l’animal et le champ stérile pour maintenir sa température corporelle.
- Placez de la gaze stérilisée (enroulée et fixée avec du ruban adhésif) sur le cou du rat pour l'utiliser comme rouleau de cou, ce qui augmentera l'exposition du champ opératoire. Notez que le positionnement approprié de l'animal est primordial pour l'identification et la dissection efficaces des nerfs.
- Préparez la peau du visage de l'animal pour la procédure. Pour assurer la désinfection, frottez trois fois le site chirurgical avec de la chlorhexidine ou une solution à base d’iode en alternance avec de l’éthanol à 70 %.
- Planifiez et marquez l’incision chirurgicale si vous le souhaitez. Manipulez l’oreille ipsilatérale dans une direction antéro-postérieure pour déterminer le pliage naturel de la peau postauriculaire.
- Pratiquez une incision de 4 à 5 mm dans le pli postauriculaire à l’aide de ciseaux à iris tranchants ou d’une lame numéro 15. Cela peut être développé plus tard dans la procédure si nécessaire.
- Disséquez brusquement le fascia sous-cutané immédiat et placez un écarteur micro-Weitlaner pour améliorer l’exposition. Notez qu’il peut y avoir des vaisseaux sanguins de petit calibre dans cette zone ; la meilleure façon de les éviter est de se rétracter vers le haut ou vers le bas via l’écarteur Weitlaner.
- Identifiez le muscle digastrique antérieur lorsqu’il se déplace dans une direction inférieure à supérieure vers son insertion le long de la base du crâne.
- Répartissez doucement à travers le ventre musculaire le long de son point d’insertion pour révéler le tendon du ventre digastrique antérieur. Notez que le tendon apparaît comme un processus blanc filmique émanant du muscle avec une insertion solide sur la base du crâne.
- Après l’identification du muscle digastrique antérieur et de son tendon, ajustez l’écarteur Weitlaner pour rétracter davantage le ventre musculaire. Notez que la région exposée par la suite est l’espace tridimensionnel où se trouve le tronc principal du nerf facial.
note: Cette région est délimitée en haut et en bas par la base du crâne, latéralement par le muscle digastrique antérieur, postéromédialement par le conduit auditif et en dessous par les structures du cou, y compris l’artère temporale superficielle.
- Après une exposition adéquate, identifiez le tronc principal du nerf facial lorsqu’il se déplace vers le bas à partir du tendon du muscle digastrique, où il sort du foramen stylomastoïdien de la base du crâne. Notez que le nerf apparaît comme une corde blanche nacrée enfermée dans le fascia parotide-massétéral de l'animal. Faites preuve de prudence lorsque vous exposez davantage le nerf pour les raisons suivantes.
- Évitez la dissection agressive ou les écartements perpendiculaires pour vous prémunir contre les lésions de neuropraxie médiées par l’étirement.
- Évitez les dissections agressives dirigées vers l’arrière et la médiale pour éviter de violer les tissus minces recouvrant le conduit auditif, car cela pourrait introduire une flore de l’oreille moyenne dans le champ chirurgical.
- Évitez d’endommager l’artère temporale superficielle par une dissection large dirigée médialement et inférieurement. Notez qu’une blessure sera identifiée par une hémorragie vive et pulsatile.
- Si l’artère est blessée, appliquez une pression rapide à l’aide d’un applicateur à bout de coton ou d’une gaze stérile à l’aide d’une pince. Des agents hémostatiques ou un scellant liquide à base de fibrine peuvent être placés à proximité. Gardez à l’esprit que l’animal peut nécessiter une injection sous-cutanée de solution saline stérile à 0,9 % pour stabiliser les liquides.
- Tracer le tronc principal en distal en disséquant le long du nerf dans une direction inférieure, en distal à partir de la sortie du foramen stylomastoïdien.
- Étendez l’incision d’origine pour exposer complètement le nerf et ses branches. Évitez de perturber la glande parotide, car cela pourrait entraîner une sialocèle postopératoire.
- Induire les types de blessures souhaités comme suit.
- Pour une blessure par écrasement, utilisez une pince de bijoutier à surface lisse pour saisir fermement le nerf et le comprimer9. Appliquez une pression constante et reproductible sur le nerf pendant 30 secondes pour assurer une blessure par écrasement appropriée.
- Pour une transection simple, saisissez le fascia recouvrant le nerf, ou l’épineurium immédiat, avec une pince à dents fines, et utilisez des microciseaux pointus pour transecter proprement le nerf à l’endroit souhaité en une seule coupe. Veillez à éviter une traction excessive sur le nerf avec la pince.
- Pour un modèle d’espace nerveux, créez l’espace nerveux souhaité en utilisant une méthode similaire à la simple blessure de section. Utilisez la tige stérilisée d’un applicateur à embout en coton, coupé à la longueur de l’espace nerveux souhaité, pendant l’opération, pour assurer la similitude du modèle de blessure entre les animaux.
3. Fermeture de la plaie
- Irriguez la plaie avec une solution saline stérile et séchez-la avec de la gaze stérile.
- Approchez les bords de la peau de manière simple et sous-cutanée avec des sutures résorbables, ou utilisez de la colle pour la peau ou des pinces à plaie, qui sont également acceptables pour la fermeture de la plaie. Placez un point de suture enfoui en prenant une morsure profonde à superficielle d’un bord de la peau, puis une morsure superficielle à profonde du bord opposé de la peau.
