Établir une infection active par le VIH dans un modèle de rat

Résumé

Source : Li, H., McLaurin, et al. A Rat Model of EcoHIV Brain Infection. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo montre la procédure d'injection de virus VIH chimériques dans le cortex du cerveau d'un rat, où l'ARN du virus s'intègre dans le génome de l'hôte, se réplique et se propage pour établir une infection active par le VIH dans le modèle expérimental.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Chirurgies stéréotaxiques du virus EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein]

1. Anesthésier les rats avec 3 % de sévoflurane. Lorsque les rats ne réagissent pas aux stimuli nocifs et que leurs réflexes sont absents, passez à l’étape 1.2.
2. Rasez les poils de la région du cerveau et stérilisez la peau deux fois avec de l’éthanol à 70 % et un gommage à base de chlorhexidine. Fixez le rat en position couchée dans l’appareil stéréotaxique.
3. Faites une incision (5-6 cm) à travers la peau le long de la ligne médiane du cuir chevelu.
4. Marquez deux positions de forage à 0,8 mm latéral, 1,2 mm rostral à bregma. Percez un trou (diamètre 0,4 mm) dans chaque position du crâne.
5. Remplir la solution titrée de lentivirus EcoHIV (1,04 × 10⁶ UT/mL) dans une seringue d’injection de 10 μL. Fixez la seringue à l’appareil stéréotaxique.
6. Abaissez l’aiguille près de la surface du trou de perçage. Mesurez et déplacez une profondeur de 2,5 mm.
7. Perfuser 1 μL de solution virale à un débit de 0,2 μL/min. Garder l’aiguille à l’intérieur de la zone d’injection pendant 5 min. Déplacer lentement l’aiguille vers le haut jusqu’à ce qu’elle soit à l’extérieur du crâne du rat.
8. Suturez la peau avec un fil de soie 4-0.
9. Stérilisez l’incision avec de l’éthanol à 70 % une fois. Injection sous-cutanée de butorphanol (Dorolex, 0,1 mg/kg de poids corporel).
10. Transférez le rat dans une chambre de récupération avec un coussin chauffant jusqu’à ce qu’il se réveille.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Solution antibiotique-antimycosique	Cellgro	Référence 30004CI	100 fois
Verre de protection	VWR	Référence 637 à 137
forer
Ethicon Vicryl Plus Antibactérien, 4-0 Polyglactin 910 Suture, 27 po. FS-2	Med Vet International	VCP422H
Seringue Hamilton	Hamilton	1701
Pince à iris	Instruments de précision mondiaux	Référence 15914
Ciseaux à iris	Instruments de précision mondiaux	500216
Appareil stéréotaxique	Kopf Instruments	Modèle 900
Ciseaux Vannas	Instruments de précision mondiaux	500086