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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Etablissement de l’infarctus dans le pont
- Préchauffez le coussin chauffant immédiatement avant l’anesthésie.
- Fixez la perceuse crâne au support sur le cadre stéréotaxique.
- Injecter par voie intrapéritonéale aux rats 50 mg/kg de kétamine et 5 mg/kg de xylazine. Vérifiez s’il n’y a pas de réponse par pincement des orteils.
- Montez le rat sur le cadre stéréotaxique en position couchée. Positionnez les barres d’oreille au-dessus du conduit auditif pour sécuriser la tête. Veillez à ce que le crâne soit maintenu à l’horizontale pour éviter toute déformation de l’injection.
- Maintenir l’anesthésie par l’isoflurane (100 % d’oxygène, 2,5 % d’isoflurane) via un cône nasal stéréotaxique pour les rats avec des orifices d’entrée et de sortie. Utilisez un coussin chauffant pour maintenir la température à 37 °C et surveillez-la tout au long de la procédure.
- Utilisez une pommade oculaire pour prévenir le dessèchement de la cornée. Utilisez des pinces pour pincer les pattes afin de s’assurer qu’il n’y a pas de réponse légère à la douleur.
- Rasez les poils du crâne avec un micro-rasoir. Appliquez circulairement le gommage chirurgical à la chlorhexidine en commençant par le site d’incision chirurgicale et en tournant vers l’extérieur.
- Faites une incision médiane de 3 cm avec un scalpel à partir de la ligne du canthus latéral bilatéral jusqu’à 0,5 cm derrière la fontanelle postérieure, qu’un marqueur chirurgical devrait marquer.
- Utilisez un coton-tige pour enlever le sang.
- Un morceau de ruban chirurgical doit être placé de chaque côté du lambeau cutané pour exposer le cuir chevelu (Figure 1).
- Retirez délicatement les tissus conjonctifs de l’os du crâne à l’aide d’un coton-tige imbibé de NaCl à 0,9 %. S’ils ne sont pas enlevés, les tissus conjonctifs se coinceront dans la perceuse.
- Identifiez le bregma. Choisissez le point central du bregma comme point d’origine et marquez-le à l’aide d’un marqueur chirurgical noir à pointe fine.
- Placez une perceuse à 6,0 mm AP, 2,0 mm ML (plage de 0,5 à 3,0 mm, Figure 2A).
- Effectuer une craniotomie (1 mm de diamètre) à l’aide d’une perceuse automatique. Procédez avec prudence car ce point est proche du sinus veineux.
- Retirez la perceuse du cadre stéréotaxique.
- Placez une sonde de 22 G avec une gaine isolée dans le cadre stéréotaxique (Figure 3A). L’extrémité de la sonde doit être placée à 2 mm au-dessus de l’extrémité proximale de la gaine (Figure 3A, B ; Figure 2B).
- S’assurer que la gaine pénètre dans le cerveau à 7 mm (7 mm DV, Figure 2B ; Figure 1C).
- Avancez la sonde le long de la gaine (figure 1D) jusqu’à ce que l’extrémité de la sonde se trouve à 9 mm sous la surface du cerveau (figure 2D).
- Connectez les électrodes à un stimulateur électrique (Figure 3C). Connectez l’anode à la sonde comme illustré à la Figure 1D. Connectez la cathode aux rats (généralement à l’oreille des rats).
- Allumez le stimulateur électrique et réglez les paramètres suivants : largeur d’impulsion unique = 4 050 ms ; tension = 50 V et courant = 4 mA (Figure 3C). Pendant la stimulation électrique, le rat présentera des tremblements. Dans cette étude, l’appareil n’a pas été allumé pour les rats du groupe témoin utilisés pour les tests comportementaux, l’IRM et le TTC.
- Laissez la sonde en position pendant 5 min après la stimulation.
- Retirez la sonde du cerveau (Figure 1F).
- Utilisez du ciment osseux pour couvrir la craniotomie. Laissez le ciment sécher avant de suturer la plaie.
- Suturez la plaie avec des filaments de suture en polyamide 4-0. Après trois ou quatre points de suture, faites des nœuds chirurgicaux standard 2-1-1.
- Injectez aux rats de la pénicilline (0,25 ml, 80 UI diluée dans 4 ml de solution saline) par voie intrapéritonéale pour prévenir l’infection.
- Injectez du méloxicam par voie sous-cutanée chez les rats à une dose de 2 mg/kg, puis répétez l’opération toutes les 24 heures.
- Surveillez les rats toutes les 15 minutes jusqu’à ce qu’ils soient complètement réveillés et ramenez-les dans la cage avec un coussin chauffant. Fournir un accès gratuit à la nourriture et à l’eau jusqu’au sacrifice.
note: Toutes les procédures doivent suivre les principes de la chirurgie aseptique. Avant la chirurgie, mettez un haut de gommage, un masque chirurgical et des gants stériles après un gommage chirurgical des mains. Conservez toujours du matériel de suture stérile dans le champ stérile.
