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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Cathétérisme artériel
- Anesthésier la souris avec une injection intrapéritonéale de kétamine et de xylazine et un analgésique selon la pratique locale (ex. : buprénorphine). Pincez les membres postérieurs avec une pince pour confirmer la bonne profondeur de l’anesthésie.
note: Pour cette étude, des souris C57BL/6N mâles âgées de 8 à 12 semaines ont été utilisées (poids de 20 à 25 g). Les auteurs ont testé sans succès des BALB/c mâles du même âge, mais n’ont pas essayé d’autres souches.
- Épilez les poils dans les régions d’intérêt (tête, cou) à l’aide d’un rasoir électrique. Assurez-vous qu’il ne reste pas de cheveux lâches pour éviter la contamination de la plaie. Par la suite, désinfectez le champ opératoire avec 70 % d’éthanol / chlorhexidine / bétadine et placez la souris en décubitus dorsal avec la tête face au chirurgien.
- Faites une incision médiane cervicale avec des ciseaux de dissection.
- Disséquez les glandes sous-mandibulaires et le tissu musculaire du cou et séparez-les afin d’exposer l’artère carotide commune. Utilisez principalement une dissection contondante à l’aide d’une pince.
- Troisième place 8-0 ligatures de soie sous l’artère carotide commune droite.
- Placez une pince sur la ligature proximale et exercez une tension dans l’artère afin que le flux soit suspendu.
- Fermez la ligature la plus distale.
- Insérez le cathéter artériel à travers un petit trou cutané préformé sur la face crânienne de l’incision. Pressez et déformez la lumière du cathéter si elle semble trop grande pour réduire le reflux sanguin. Fixez avec les trois ligatures.
- Fixez le cathéter à la peau pour éviter la luxation. Pour ce faire, utilisez une suture (par exemple, un monofilament 5-0, non résorbable) qui relie le cathéter à la peau dans la zone du trou cutané préformé.
2. Trachéotomie
- Disséquez la musculature pré-trachéale à l’aide d’une pince
.
- Placez deux 8-0 ligatures de soie sous la trachée.
- Trachéotomiser à l’aide de micro-ciseaux aussi proximal que possible pour éviter une ventilation unilatérale. Utilisez une ligne de coupe horizontale entre deux cartilages trachéaux.
- Insérez le tube de ventilation et fixez-le avec les deux ligatures préparées.
note: L’extrémité proximale de la trachée n’a pas besoin d’être ligaturée.
- Fermez la peau avec une suture courante (par exemple, monofilament 6-0, non résorbable).
- Aérer la souris avec une fréquence de 150/min et un volume courant de 200 μL.
3. Induction de la mort cérébrale (BD)
- Placez la souris en position couchée.
- Retirez la peau du crâne à l’aide de ciseaux chirurgicaux et de pinces pour maintenir la peau.
- Percez un trou de forage de calibre 1 mm paramédialement au-dessus du cortex pariétal gauche. Arrêtez de percer avant de percer l’os compact interne et la dure-mère.
- Pénétrer le dernier pont tissulaire du crâne à l’aide d’une pince émoussée, en enlevant les arêtes vives.
- Insérez le cathéter à ballonnet, de manière à ce qu’il soit entièrement à l’intérieur de la cavité crânienne. Assurez-vous que le ballon est pré-rempli de solution saline et que tout l’air est évacué.
- Commencer le gonflage à ~0,1 mL/min sur une période de 10 à 15 min (volume total de 0,8 à 1,2 mL) à l’aide d’un pousse><-seringue.
note: La souris présentera une myoclonie, une mydriase, une activité convulsive supplémentaire et des halètements agonaux.
- Prononcez la souris en état de mort cérébrale une fois que la queue de la souris est devenue raide et érigée.
note: La MB est confirmée par un pic de pression artérielle initial caractéristique (réflexe de Cushing), l’absence de réflexes du tronc cérébral et une respiration spontanée. Des tests d’apnée réguliers doivent être évités pendant les expériences, car les souris peuvent devenir instables sur le plan circulatoire en raison d’un manque d’oxygène.
- Arrêtez le gonflage du cathéter à ballonnet.
- Mettez une couverture chauffante sur la souris pour éviter l’hypothermie.