Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Procédure expérimentale de lésions cérébrales induites par laser
- Anesthésier le rat avec un mélange de 2 % d’isoflurane dans de l’oxygène, permettant une ventilation spontanée. Vérifiez que la profondeur de l’anesthésique est suffisante en pinçant la queue avec une pince pour voir si le réflexe de retrait est absent.
- À l'aide d'un coussin chauffant rectal régulé par la température, maintenez la température corporelle centrale du rat à 37 °C tout au long de la procédure expérimentale.
- Épilez les poils locaux à l’aide d’un rasoir et désinfectez-les avec de l’alcool à 70 % et du gluconate de chlorhexidine à 0,5 %. Répétez l’étape de désinfection deux fois de plus.
REMARQUE : L’incision chirurgicale doit avoir une largeur d’environ 3 cm. Retirez les poils d’au moins 2 cm autour de la zone d’incision.
- Placez le rat sur un support de tête stéréotaxique en position couchée. Faites une incision de 3 cm pour refléter le cuir chevelu latéralement et exposer la zone entre Bregma et Lambda.
- Maintenez l’anesthésie par le cône nasal.
- Utilisez un laser néodyme-YAG (Nd-YAG) (longueur d’onde maximale de 1064 nm) pour administrer 50 points J X 10, avec une durée d’impulsion de 1 s, à la zone exposée du crâne au-dessus de l’hémisphère droit.
- Assurez-vous que la partie génératrice du laser de l’appareil se trouve à 2 mm de la zone exposée pour produire un faisceau laser. 50 pointsJ X 10 ont été sélectionnés après une évaluation minutieuse des différentes combinaisons énergie/surface. Cette combinaison est efficace et ne provoque pas de destruction osseuse du crâne après l’administration pendant moins d’une seconde.
REMARQUE : 2 mm est la distance entre la borne du faisceau laser (du câble optique à travers lequel il passe) et l’os du crâne. Dans le cas où une lentille de mise au point est utilisée, la distance doit être calculée en tenant compte de l’angle d’inclinaison de la lentille pour focaliser le faisceau dans la zone de dommage souhaitée. Assurez-vous d’une sécurité adéquate lors de l’utilisation d’un appareil laser, y compris une formation appropriée et une protection oculaire.
- Retirez le rat de l’appareil et fermez le cuir chevelu avec des sutures chirurgicales en soie 3-0.
- Interrompez l’anesthésie et retournez le rat dans sa cage pour qu’il se rétablisse. Administrer localement 0,1 ml de bupivacaïne à 0,25 % pour réduire la douleur postopératoire immédiatement après la chirurgie.
note: L’ensemble de la procédure devrait durer moins de 5 minutes s’il est effectué correctement.
