Établissement d’un modèle murin de neuropathie des petites fibres à l’aide de la résinifératoxine

Résumé

Source : Lee, Y. et al., Établissement d’un modèle murin d’une neuropathie pure à petites fibres avec l’agoniste ultrapotent du potentiel de récepteur transitoire vanilloïde de type 1.J. Vis. Exp.(2018).

Cette vidéo présente une méthode permettant d’établir un modèle de neuropathie à petites fibres chez la souris à l’aide de l’agoniste TRPV1 résinifératoxine (RTX). Il décrit les étapes impliquées dans l’administration de RTX à des souris et explique comment RTX induit la mort neuronale dans des neurones sensoriels de petit diamètre, établissant ainsi le modèle de neuropathie.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Établissement de la neuropathie à la résinifératoxine (RTX)

ATTENTION : Le RTX est neurotoxique et dangereux. Au contact, il agit comme un irritant pour les yeux, les muqueuses et les voies respiratoires supérieures. Évitez l’inhalation et portez des lunettes et des blouses de laboratoire pendant la préparation du RTX. Rincer abondamment à l’eau en cas de contact avec la peau ou après manipulation.

1. Ajouter 1 mg de poudre RTX à un mélange de 200 μL de volume égal de Tween 80 et d’éthanol absolu (100 μL pour chaque solvant).
2. Prélever la solution RTX (12 μL/flacon) et la conserver à -20 °C jusqu’à 3 mois. Cela constitue l’action RTX ; jetez la solution RTX restante à l’expiration.
3. Diluer le stock RTX avec une solution saline normale jusqu’à un volume final de 600 μL. La concentration finale de la solution RTX doit être de 0,01 %, ce qui équivaut à 1 μg RTX dans une solution de véhicule de 10 μL.
4. Utiliser des souris ICR mâles adultes de 8 semaines (35-40 g) comme animaux de laboratoire et administrer une dose unique de solution RTX (dose : 200, 50 et 10 μg/kg, respectivement) par voie intrapéritonéale (i.p.) avec une seringue de micro-injection aux souris. Les souris ont été anesthésiées par un inhalateur avec 5 % d’isoflurane pour l’anesthésie profonde. Si les souris ont montré une action de sevrage des extrémités pendant l’injection de RTX, les souris devraient prendre plus de temps pour inhaler l’anesthésie.
   Exemple : Si la souris pèse 40 g, elle recevra alors 20 μL de la solution RTX, ce qui représente la dose de 50 μg/kg.
5. Donnez à un groupe de souris un volume égal de véhicule (10 % de Tween 80 et 10 % d’éthanol absolu en solution saline) comme témoin.
6. Après l’injection de RTX, remettez les souris dans une cage en plastique selon un cycle de 12 heures de lumière et d’obscurité de 12 heures et fournissez-leur de la nourriture et de l’eau à volonté.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactif chimique
Résine de résifératoxine	sigma	Réf. R8756
Préadolescent 80	sigma	P1754