Une technique pour infliger un traumatisme crânien fermé chez les mouches drosophiles

Dans cet article

Résumé

Source : Sun, M., et al. Une nouvelle méthode pour modéliser l’encéphalopathie traumatique chronique chez la drosophile. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo montre une procédure permettant d’infliger une blessure traumatique à la tête fermée à des mouches drosophiles anesthésiées à l’aide d’un dispositif de frappe avec un impacteur propulsé par gaz. La blessure affecte la fonction neuronale et altère la capacité de marche.

Protocole

1. Assemblage du dispositif de frappe (Figure 1)

Retirer le piston d’une seringue à tuberculine de 1 ml. Coupez le baril à la marque de 1 mL.
Retirez une barrière anti-aérosol (3 mm de hauteur x 4 mm de diamètre) d’une pointe de pipette de 200 μL et utilisez-la comme impacteur. Placez l’impacteur à l’intérieur du canon de la seringue. Tapotez doucement le canon pour déplacer l’impacteur vers l’extrémité de l’embout, le côté plat recouvrant l’ouverture de la buse.
Fixez l’extrémité de l’embout du baril à un tube en plastique relié au régulateur de débit de dioxyde de carbone (CO₂) d’une station d’anesthésie de la drosophile.
Tenez le canon verticalement et fixez-le à un support de serrage standard afin que l’impacteur reste au bas du canon.
Modifiez une pointe de pipette de 200 μL pour en faire le porte-mouche.
1. Coupez à 4 mm de la pointe pour faire une ouverture de 0,8 mm de diamètre, ne laissant apparaître que la tête de la mouche.
  REMARQUE : Le thorax et toutes les autres parties du corps de la mouche resteront à l’intérieur de la pointe de la pipette.
Modifiez l’embout d’une pipette de 1 000 μL et le capuchon d’une aiguille de seringue de 1 mL pour former le connecteur.
1. Coupez à 44 mm de l’ouverture de la pointe. Prenez un capuchon d’aiguille de seringue de 1 ml de 6 mm et enfoncez-le fermement dans le segment restant de la pointe de pipette de 1 000 μL.

2. Fonctionnement du dispositif de frappe

Anesthésier une seule mouche femelle adulte de 2 jours à l’aide de CO₂ sur un coussin anti-mouches.
Transférez-le délicatement sur le porte-mouche à l’aide d’un pinceau fin. Tapotez doucement le support pour que la tête de la mouche soit visible à l’extérieur de l’extrémité de la pointe. Si le trompe tue-mouches est exposé à l’extérieur de l’embout, rentrez-le doucement à l’intérieur de l’embout à l’aide d’une aiguille de seringue émoussée de 1 ml.
note: Assurez-vous de garder la trompe de mouche à l’intérieur du support. Sinon, la mouche peut mourir d’une blessure par trompe de succion.
Serrez le porte-mouche sur le corps de la seringue avec le connecteur de sorte que la tête de la mouche soit tournée vers le bas.
Réglez la pression du gaz sur 100 kPa. Ajustez le débit en fonction de la conception de l’expérience.
Allumez et éteignez rapidement l’interrupteur à bascule du régulateur de débit afin que l’impacteur frappe la tête de mouche une fois.
Soulevez le porte-mouche et déplacez-le sur un coussin anti-mouches. Inversez le porte-mouche et tapotez doucement sur le côté pour laisser sortir la braguette. Laissez la mouche dans un flacon vide pour récupérer.

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Résultats

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Graphique 1. Schéma du dispositif de frappe. L’appareil utilisait des matériaux facilement disponibles dans un laboratoire de drosophile : 1) pointe de pipette de 200 μL, 2) seringue à tuberculine de 1 ml, 3) impacteur, 4) tube de connexion accroché à une station d’anesthésie de la drosophile et 5) connecteur pour serrer l’embout sur la seringue.