Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Modèle murin de lésion cérébrale néonatale HI
- Anesthésie les chiots avec de l’isoflurane.
- Placez les chiots (moins de 5) dans une boîte anesthésiante et fermez le couvercle.
- Allumez le système d’anesthésie pendant environ 15 min ; ajustez le gaz et l’isoflurane à l’aide d’un appareil d’anesthésie de table. Réglez le débitmètre d’oxygène à 1,5 L/min. Ajustez le vaporisateur d’isoflurane à 3-5 % pour l’induction de l’anesthésie.
- Après 15 min, ajustez le vaporisateur d’isoflurane à 1-2 % pour le maintien de l’anesthésie.
- Placez un chiot entièrement anesthésié sous un microscope de dissection (abdomen face au chercheur) et fixez-le avec du ruban adhésif.
- Faites une incision de ~0,7 mm dans le cou à l’aide de ciseaux stérilisés.
- Retirez soigneusement le tissu adipeux à l’aide d’une pince stérilisée et exposez l’artère carotide droite unilatérale.
- Frappez unilatéralement l’artère carotide droite avec une suture résorbable 5-0.
- Suturez l’incision dans le cou avec une suture 5-0.
- Placez chaque petit dans une chambre hypoxique chaude à 37 °C pendant 1 h pour la récupération. Ne fermez pas le couvercle de la chambre.
- 1 h après l’opération, lorsque les petits sont complètement réveillés, fermez le couvercle de la chambre d’hypoxie et diminuez les niveaux de gaz pour établir des conditions hypoxiques (8 % O2 et 92 % N2).
- Après 90 minutes d’hypoxie, remettez les chiots dans leurs cages.
- Une semaine après la lésion cérébrale HI, répétez l’étape 1.
- Après l’anesthésie, faites une incision dans le cuir chevelu avec des ciseaux et des pinces stérilisés pour identifier la lésion cérébrale dans la zone postérolatérale de l’hémisphère droit.
note: Ce traitement induit l’hypoxie chez les chiots. La présence et l’étendue des lésions cérébrales chez toutes les souris sont évaluées visuellement à l’œil nu à travers le crâne semi-transparent. Selon la taille ou le volume de la décoloration (c’est-à-dire la lésion cérébrale), les petits sont classés en groupes. S’il n’y a pas de lésion corticale visible, la souris est classée dans le groupe « aucune lésion corticale ». S’il y a une lésion corticale visible (c’est-à-dire une lésion dans l’hémisphère droit), la souris est classée dans le groupe des « lésions corticales ». Étant donné que la classification des souris en groupes se fait une semaine après l’opération, les regroupements peuvent être modifiés lorsque les morphologies des échantillons de cerveau sont clairement définies au moment du sacrifice.
