Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Intervention chirurgicale
Remarque : 20 rats Sprague-Dawley mâles ont reçu une micro-injection de protéine bêta-amyloïde composite (Aβ) dans le ventricule latéral et le noyau thalamique antéro-dorsal et ont été désignés comme le groupe composé traité par Aβ. 20 autres rats ont été soumis à la même opération, mais ont reçu une micro-injection de solution saline de diméthylsulfoxyde (DMSO) à 0,1 % et ont été désignés comme le groupe opéré par placebo.
- Anesthésie les rats avec de l’isoflurane à 100 % par inhalation, puis retiens-les sur un appareil stéréotaxique cérébral.
- Rasez la fourrure sur le sommet de la tête avec des ciseaux chirurgicaux et désinfectez avec de l’iodophore. Ensuite, couvrez une serviette chirurgicale jetable sur la tête.
- Faites une incision sur la peau de la tête le long de la calvaria longitudinale médiane avec des bistouries chirurgicaux et des ciseaux.
- Séparez le tissu sous-cutané et le fascia, essuyez le calvarium du crâne avec du coton sec stérile pour arrêter le saignement et marquez le bregma avec un marqueur.
- Reportez-vous à la carte stéréotaxique du cerveau du rat en considérant le bregma comme point d’origine, marquez les trois points, le noyau thalamique antéro-dorsal (ad) (postérieur (P) : 2,0 mm jusqu’au bregma ; latéral (L) : 1,4 mm vers la ligne médiane) pour l’injection du facteur de croissance transformant humain recombinant-β1 (RHTGF-β1) et la fixation d’une vis, la zone du ventricule latéral (VG) (postérieure (P) : 0,8 mm à la bregma ; latérale (L) : 2,0 mm vers la ligne médiane) pour l’injection de la protéine bêta-amyloïde 25-35 (Aβ25-35) et du trichlorure d’aluminium (AlCl3), et la deuxième vis de fixation (avant (F) : 2,0 mm vers le bregma ; latérale (L) : 1,5 mm vers la ligne médiane).
- Percez doucement trois trous de 1 mm de diamètre avec une perceuse à os flexible désignée aux trois points ci-dessus du crâne (1,5. pas). Ne vissez pas plus profondément que nécessaire pour éviter de poignarder le tissu cérébral.
- Arrêtez le saignement et nettoyez la surface du crâne à plusieurs reprises avec du coton sec et stérile.
- Insérez une aiguille reliée à la pompe de micro-injection dans le cerveau à 4,6 mm de profondeur et injectez doucement 1 μL de RHTGF-β1 (10 ng) dans la zone publicitaire. Maintenez l’aiguille pendant 2 minutes après l’injection et retirez lentement l’aiguille.
- Fixez les deux vis dans le crâne, désignées dans les points de l’annonce, et la deuxième vis de fixation du crâne (qui a été désignée à 1,5. étape) avec un petit tournevis. Ne vissez pas plus profondément que nécessaire pour éviter de poignarder le tissu cérébral.
- Assemblez le système d’implantation de la canule et insérez la canule factice dans la canule de guidage après désinfection à haute pression.
- Insérez la canule de guidage en tube d'acier inoxydable jusqu'au cerveau à 4,6 mm dans la zone VG à travers le trou du crâne à l'aide du porte-canule de l'appareil stéréotaxique des rats.
- Mélangez le matériau de base de la prothèse avec de l’eau de base de la prothèse dans un rapport de 1,5 g par 1 ml, mettez la pâte pour couvrir le socle en plastique de la canule de guidage et deux vis pour immobiliser la canule de guidage et couvrir toute l’incision cutanée pour éviter une infection cutanée.
- Le jour 2 de l’opération, les rats ont été anesthésiés par inhalation d’isoflurane à l’aide de l’appareil d’anesthésie pour petits animaux. Tirez la canule factice, insérez la canule interne dans la canule de guidage et vissez la vis de fixation pour immobiliser la canule interne.
- Réglez le tuyau en polyéthylène qui relie la pompe de micro-injection à la canule interne et régulez la vitesse d’injection à 1 μL/min. Microinjectez l’Aβ25-35 ou l’AlCl3 dans le VG.
- Micro-injecter 4 μg (1 μL) Aβ25-35 par jour pendant 14 jours le matin et 3 μL AlCl3 (1 %) par jour pendant 5 jours l’après-midi sous anesthésie isoflurane.
- Attendez 5 minutes après la fin de l’injection, retirez doucement la canule interne et insérez à nouveau la canule factice dans la canule de guidage.
- Au 15e jour, post-opératoire (qui correspond au dernier jour d’injection de Aβ25-35), démonter le système d’implantation de la canule. Retirez délicatement le matériau de base de la prothèse solide à l’aide de ciseaux chirurgicaux et de pinces, dévissez les deux vis, retirez la canule de guidage et désinfectez la plaie avec de la bétadine. Remplissez le trou du crâne avec du ciment osseux et suturez la peau à l’aide d’une méthode simple de suture interrompue.
- Effectuer la même opération avec le groupe simulé et micro-injecter 0,1 % de solution saline DMSO.
