Génération d’un modèle murin avec une infection du système nerveux central

Résumé

Source : Shen, T., et al. Un modèle murin de maladie semblable à l’encéphalite virale aiguë induite par le virus de la dengue. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre la génération d’un modèle de souris avec une infection du SNC. Un chiot allaitant reçoit une injection du virus à la fois par voie intracrânienne et intrapéritonéale. Le virus se propage, infectant le SNC, provoquant la mort des cellules neuronales et l’inflammation. Le chiot est évalué pour détecter les symptômes d’infection à mesure que la maladie progresse.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Procédure d’infection

1. Préparer des stocks non adaptés de DENV2 (souche PL046)9 (obtenus à l’origine des Centers for Disease Control de Taïwan, allant de 2,5 x 10⁷ à 1 x 10⁹ PFU/mL).
2. Diluer le stock de virus à 1 x 10⁶ PFU avec le Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium jusqu’à un volume total de 40 μL.
3. Remplir une seringue de 0,3 mL munie d’une aiguille de 30 G avec 10 μL (2,5 x 10⁵ PFU) de virus dilué et remplir une autre seringue de 0,3 mL munie d’une aiguille de 30 G avec 30 μL (7,5 x 10⁵ PFU) de virus dilué.
4. Tenez la souris de lait ICR (Institut de recherche sur le cancer) âgée de 7 jours et effectuez les étapes suivantes.
   1. Pour l’injection intracérébrale, maintenez la souris en position couchée en appuyant sur le pavillon entre l’index et le pouce, et injectez par voie intracérébrale 10 μL de virus dilué dans la zone lambda, le point situé à l’intersection de la suture sagittale et de la suture lambdoïde.
   2. Après l’injection intracérébrale, maintenez la souris en position couchée à l’aide de l’index et du pouce, et injectez doucement 30 μL de virus dilué par voie intrapéritonéale dans l’abdomen murin.
      note: Pour éviter le cannibalisme, on utilise de l'alcool à 75 % pour créer une perte temporaire de sensation olfactive chez la mère. De plus, il est suggéré de couvrir la litière avec les selles et l'urine de leur mère.
5. Remettez les souris allaitantes dans leurs cages et attendez 5 min pour vérifier leur sécurité après la stimulation avec l’avidité des souris, y compris la marche et la succion du lait maternel.
   note: Le plus souvent, les souris présentent une activité post-stimulation normale, et il ne semble pas y avoir d’effets nocifs suite au défi technique.
6. Évaluez les progrès quotidiens des souris en termes de poids corporel (à l’aide d’une balance au microgramme), de maladie aiguë de type encéphalite virale (par score de maladie comme décrit dans la section 2) et de taux de survie.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Roswell Park Memorial Institute 1640 moyen (RPMI)	Gibco	Référence 11875-085	Virus diluant
Seringue à insuline de 0,3 mL	BD Ultra-FineII	328838	Injection intracérébrale et intrapéritonéale
Microbalance	LabX de METTLER TOLEDO	AL104	Poids souris
DENV2 non adapté (souche PL046)	Les Centres de contrôle des maladies de Taïwan	-	Infecter la souris
Souris allaitante de l’Institut du cancer (ICR)	BioLASCO Taiwan Co., Ltd	-	Notre modèle murin