$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Abrasion du coussinet du pied de souris
- Anesthésie une souris C57BL/6 (âgée de 5 à 7 semaines) avec un anesthésique gazeux isoflurane, administré à une dose de 3 % via un petit système d’anesthésie (chambre).
- Placez la souris dans le plan chirurgical de l’anesthésie sur son dos, avant l’inoculation, dans le coussinet du pied arrière. Fixez un cône nasal avec un diaphragme (une fente suffisamment grande pour s’adapter au museau de l’animal) à la souris et administrez un anesthésique gazeux isoflurane à une dose constante de 1,5 % à 2,0 %.
- Surveillez de près la souris pour détecter une réponse à un stimulus douloureux créé par un pincement énergique de l’orteil avec une pince
.
- Saisissez légèrement un coussinet arrière avec une pince plate.
- Abrasez doucement la peau glabre de la coussinet arrière du pied arrière environ 20x, entre le talon et les coussinets de marche, avec une planche d’émeri (grain 100 à 180). Ne pas provoquer de saignement en abrasant trop fréquemment ou en appliquant trop de pression.
- À l’aide d’une pince fine, décollez lentement la couche cornée détachée par abrasion pour exposer la couche basale.
2. Inoculation du coussinet plantaire PRV
- Préparez l’inoculum du virus dilué au titre désiré dans un milieu DMEM contenant 2 % de sérum fœtal bovin (FBS) et 1 % de pénicilline/streptomycine (table des matières).
- Quantifier le nombre d’unités formant des plaques (PFU) dans le stock viral sur les cellules PK15 afin de calculer et de normaliser la dose virale et de diluer l’inoculum viral en conséquence.
note: Dans cette étude, une souche virulente de RVP (PRVBecker) a été utilisée à une dose de 8 x 106 PFU. Cette dose a été optimisée lors d’une expérience préliminaire précédente afin de s’assurer que tous les animaux inoculés présentaient des symptômes cliniques 82 h après l’inoculation (hpi).
- Conservez l’inoculum du virus sur de la glace et mélangez délicatement avant utilisation.
- Ajouter une gouttelette de 20 μL d’inoculum viral (8 x 106 PFU) sur le coussinet plantaire abrasé (administration topique). Effectuer des inoculations simulées (moyennes seulement) en parallèle.
- Frottez doucement 10x avec la tige d’une aiguille pour faciliter l’adsorption du virus. Évitez de gratter avec la pointe de l’aiguille. Répétez cette étape toutes les 10 minutes.
- Gardez la souris sous anesthésie pendant 30 minutes jusqu’à ce que le coussinet plantaire abrasé soit sec.
- Après avoir arrêté l’anesthésie, surveillez la souris jusqu’à ce qu’elle puisse maintenir sa décubitus sternal et placez-la dans une cage individuelle pour un suivi clinique et un échantillonnage.