Induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin

Résumé

Source : Schmitz, K., et al. Bioluminescence et imagerie proche infrarouge de la névrite optique et de l’inflammation cérébrale dans le modèle EAE de la sclérose en plaques chez la souris. J. Vis. Exp (2017).

Dans cette vidéo, un modèle murin de sclérose en plaques est établi à l’aide d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). On injecte à la souris une émulsion contenant un peptide neuronal et un adjuvant, déclenchant une réponse immunitaire qui active les lymphocytes T autoréactifs. Ceci est suivi d’une injection de toxine coquelucheuse (PTX) pour augmenter la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique, permettant aux lymphocytes T autoréactifs d’infiltrer le cerveau. Cette infiltration déclenche une cascade de signalisation qui finit par entraîner des dommages à la myéline, imitant la condition démyélinisante de la sclérose en plaques.

Protocole

1. Induction EAE chez les souris SJL/J

1. souris
   1. Utilisez des souris SJL/J femelles de 11 semaines et laissez-les s’habituer à la salle d’expérimentation pendant environ 7 jours. Utilisez n = 10 souris par groupe.
   2. Pour évaluer les effets du médicament, administrer continuellement le médicament et le placebo pour le groupe témoin par le biais d’eau potable ou de granulés alimentaires à partir de 3 ou 5 jours après la vaccination (n = 10 par groupe). Au plus fort de la maladie, administrez un médicament ou un placebo avec du lait ou des cornflakes imbibés d’eau à 3 % de sucre.
2. Matériel de vaccination
   1. Utiliser un kit d'induction EAE composé d'un antigène (peptide de protéine protéolipide, PLP139-151, émulsion de 1 mg/mL) dans une émulsion avec un adjuvant de Freund complet (CFA, Mycobacterium tuberculosis H37 Ra tué par la chaleur) et de 2 flacons (5 μg chacun) de toxine coqueluche lyophilisée (PTX).
   2. Dissoudre le PTX (2 μg/mL) dans 1 solution saline tamponnée au phosphate (PBS, c.-à-d. ajouter 1,5 mL de PBS dans chaque tube PTX, bien mélanger, retirer avec la même pointe de pipette et ajouter à 1 mL de PBS dans un tube de 50 mL) ; bien mélanger.
3. immunisation
   1. Injecter PLP/CFA par voie sous-cutanée en 2 portions, chacune de 100 μL, toutes deux à la base de la queue.
   2. Injecter 100 μL de PTX par voie intrapéritonéale (i.p.) deux fois par souris, la première 1 à 2 heures après l’immunisation et la seconde à 24 h.
   3. Pour les souris témoins, injectez du CFA sans PLP (2 portions de 100 μL) plus du PTX sans PLP.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Émulsion PLP139-151/CFA	Hooke Labs, Saint-Laurent, MA	EK-0123	Kit d’induction EAE
Toxine coquelucheuse	Hooke Labs, Saint-Laurent, MA	EK-0123	Kit d’induction EAE
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, États-Unis		Système de bioluminescence et d’imagerie infrarouge
Logiciel LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, États-Unis	CLS136334	Logiciel d’analyse IVIS
L’isoflurane	Abbott Labs, Illinois, États-Unis	Référence 26675-46-7	anesthésique