Article de méthode

Évaluation de la fonction motrice dans un modèle expérimental de neurite auto-immune chez la souris

8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

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Source : Gonsalvez, D. G., et al., A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo illustre le processus d’évaluation de la dysfonction motrice dans un modèle murin par l’administration de toxine coqueluche et d’un inoculum contenant des peptides et des adjuvants imitant la myéline, suivie de tests sur tapis roulant pour évaluer la fonction motrice et évaluer les lésions nerveuses résultantes dues à l’activation immunitaire et à la démyélinisation.

Protocole

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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Induction EAN (Névrite Auto-immune Expérimentale)

REMARQUE : L’EAN peut être induit avec succès chez les souris mâles C57BL/6 âgées de 6 à 8 semaines. Le protocole d’induction dure 9 jours au total. Le jour 0 correspond au jour de la première vaccination. Pour ce protocole, les injections ont été effectuées sous anesthésie (voir étape 1.1.2 ci-dessous).

  1. Le jour -....

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Résultats

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Tableau 1 : Paradigme du score clinique EAN.

scorecritèresNotes et commentaires sur les critères d’évaluation
0Souris normale
1Moins vif OU mousseuxCeci est évalué en r.......

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
C57BL/6, mâle, 6-8 semainesAustralian Bioresources Cenre, WA, Australie
Toxine coquelucheList Biological Laboratories, Inc., CA, États-Unis#181
0,1 M de souris isotonique phosphaté tamponné salin (MT-PBS)Les laboratoires auront leur propre protocole.
L’isofluranePharmachem, QLD, AustralieLes laboratoires auront leur propre protocole d’administration.
Peptide P0180–199Wuxi Nordisk Biotech Co. Lieutenant SHG, CHNP0180–199, séquence S–S–K–R–G–R– Q–T–P–V–L–Y–A–M–L–D–H–S–R–S
Mycobacterium tuberculosis tué par la chaleur (souche H37RA)Difco, MI, États-Unis#231141
Adjuvant complet de Freund (FCA)Difco, MI, États-UnisRéf. 263910
16 % de paraformaldéhyde (PFA)Services de microscopie électroniqueRéf. 15710Diluer à 4 % de PFA le jour du prélèvement des tissus.
25 % de glutaraldheydeProSciTech Pty Ltd, QLD, Australie#11-30-8Diluer à 2,5 % de glutaraldéhyde le jour de la fixation.
Azoture de sodiumChem-Supply Pty Ltd, SA, AustralieSL189Création d’un stock de 10 % (p/v) dans des PB-MT de 0,1 M. Utiliser à 0,03 % (v/v).
saccharoseChem-Supply Pty Ltd, SA, AustralieSA030Utiliser à 30 % (p/v).
Température de coupe optimale (OCT) fluideSakura Finetek, Californie, États-UnisRéf. 4583
Sérum d’âne normalMerck Millipore, MA, États-Unis#S30-100Utilisation comme diluant d’anticorps à 10 % (v/v) ou à une autre concentration déterminée par son propre laboratoire.
Triton-X 100Sigma Aldrich, MI, États-Unis#90o2-31-1Utilisation dans un diluant d’anticorps à 0,3 % (v/v) ou à une autre concentration déterminée par son propre laboratoire.
Protéine précurseur anti-amyloïde de lapin (APP)Invitrogen (Life Technologies), Californie, États-UnisS12700Utilisé à 1:400 ou titré dans son propre laboratoire.
Protéine 1 associée à l’anti-contactine du lapin (Caspr)Don du Prof Elior Peles, Institut Wiezmann des Sciences, IsraëlUtilisé à 1:500 ou titré dans son propre laboratoire.
Anticorps secondaires conjugués à Alexa Fluor appropriésSondes moléculaires (Life Technologies), OR, États-UnisdiversUtiliser à 1:200 ou titrer dans son propre laboratoire. Le choix de l’espèce dans laquelle l’anticorps a été élevé et d’Alexa Fluor choisi est à la discrétion de chaque laboratoire.
Solution de montage aqueuxDako (Agilent), CA, États-Unis#S3023Chaque laboratoire aura sa propre préférence.
équipement
Seringue de 0,5 mL avec aiguilles de 30 gBd#326105
Aiguilles de 23 gBd#305143
Tampon encreur rougeN'importe quel tampon encreur rouge ou colorant alimentaire rouge pourrait être utilisé pour marquer les pattes des animaux.
Appareil DigiGate (tapis de course inclus)eMouse Specifics Inc. Framingham, MA
Système d’imagerie DigiGateeMouse Specifics Inc. Framingham, MA
chronomètreN’importe quelle minuterie peut être utilisée.
Logiciel DigiGait 8eMouse Specifics Inc. Framingham, MA
Microscope de dissectionZeissTout microscope de dissection approprié peut être utilisé.
Toboggans chargésSuperfrost Plus, Lomb Scientific Pty LtdSF41296SP
CyrostatLeicaTout cyrostat approprié peut être utilisé.
Équipement de perfusion et instruments de dissectionLes laboratoires auront leurs propres protoctols de perfusion.
Chambre humifiée opaqueLes laboratoires peuvent produire leurs propres produits à l’aide d’un récipient en plastique opaque.
PAP penneGeneTex (États-Unis)Un crayon de cire ou une tension superficielle peut également être utilisé pour créer un puits autour de la section du tissu.
Microscope confocalZeis LSM780Tout microscope confocal avec des lignes laser appropriées peut être utilisé.
FIDJI/Image JInstituts nationaux de santéDisponible à partir de www.fiji.sc

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Mots-clés

Experimental Autoimmune NeuritisMotor Function AssessmentPertussis Toxin InjectionMyelin Mimicking PeptidesTreadmill TestBlood Nerve BarrierSubcutaneous InjectionGait Function ImagingC57BL 6 MiceDemyelination Assessment

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