Génération d’un modèle murin de lésion cérébrale traumatique à l’aide d’un dispositif de percussion à fluide latéral

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Soins aux animaux

1. Utilisez des souris C57BL/6J mâles âgées de 5 à 6 semaines (20-25 g de poids) dans cette expérience.
2. Maintenez les souris sur un cycle lumière/obscurité de 12 h/12 h et assurez-vous qu’elles reçoivent de la nourriture et de l’eau à volonté. Fournir les mêmes quantités de nourriture et d’eau aux groupes fictifs et TCC tout au long de l’étude.
3. Faites tous les efforts possibles pour minimiser la douleur et l’inconfort de l’animal.

2. Induction d’un traumatisme crânien

1. Injecter de la kétamine (80-100 mg/kg)/de la xylazine (10 mg/kg) IP pour l’anesthésie. Testez la profondeur de l’anesthésie à l’aide d’un réflexe oculaire ou d’un réflexe de douleur. Utilisez des larmes artificielles ou une pommade oculaire lubrifiante pour empêcher les yeux de se dessécher.
2. Après l’anesthésie, mettez la souris en position couchée. Utilisez un coussin chauffant à température contrôlée pour maintenir la température à 37 °C pendant la chirurgie et pendant 30 minutes après un traumatisme crânien.
3. Rasez les poils de la zone d’incision.
4. Désinfectez le cuir chevelu avec de l’éthanol à 70 % à l’aide de trois gommages alternés, puis incisez le cuir chevelu dans un plan sagittal.
5. À l’aide d’une pince, rétractez l’incision des deux côtés et séparez légèrement le périoste.
6. À l’aide d’un marqueur, tracez un cercle (3 mm de diamètre) sur la zone pariétale droite du crâne, à 2 mm de la ligne médiane.
7. Percez le crâne avec une perceuse électrique. Assurez-vous que cette étape est utilisée avec précaution pour éviter que la dure-mère ne soit endommagée.
8. Retirez le rabat osseux et exposez une petite fenêtre osseuse (3 mm de diamètre).
9. Placez une canule en plastique (diamètre interne = 2,5 mm, longueur = 8 mm) sur la craniotomie et collez la canule sur le crâne à l’aide d’un acrylique dentaire.
10. Remplissez la canule avec du NaCl stérile à 0,9 % (solution saline normale) à l’aide d’une seringue (5 ml) pour vous assurer qu’il n’y a pas de bulles dans la canule.
11. Allumez l’oscilloscope et l’amplificateur et assurez-vous que le tube haute pression de l’appareil LFPI est exempt de bulles d’air. Testez l’appareil en délivrant environ 10 impulsions jusqu’à ce qu’il donne un signal stable. Ajustez l’angle de la position de départ du pendule pour atteindre une intensité d’impulsion d’environ 2,0 atm.
12. Connectez la canule de blessure à l’appareil LFPI. Induire une lésion cérébrale en appuyant sur la gâchette et en relâchant le pendule. Ensuite, obtenez une impulsion et transmettez-la à la dure-mère à travers l’ensemble du système de tuyauterie fermé rempli de liquide.
13. Faites opérer les souris du groupe fictif avec la même procédure chirurgicale. N’effectuez pas le LFPI.