Induction médiée par Cre-LoxP de malformations caverneuses cérébrales dans un modèle murin

Résumé

Source : Choi, J. P., et al. Induction et imagerie micro-CT de malformations caverneuses cérébrales dans un modèle murin. J. Vis. Exp. (2017)

Dans cette vidéo, un bébé souris génétiquement modifié portant le gène Ccm2 flanqué de sites loxP et d’une créase recombinase fusionnée à un récepteur d’œstrogène est utilisé pour induire des malformations caverneuses cérébrales (CCM). L’administration de 4-hydroxytamoxifène active Cre dans les cellules endothéliales, entraînant la délétion de Ccm2 et la formation de CCM dans le cerveau.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Induction de malformations caverneuses cérébrales ou CCM dans des modèles murins

1. Croisement Cdh5-CreErt2 ; souris Ccm2fl/fl avec Ccm2fl/fl pour générer des portées avec Cdh5-CreErt2 ; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) petits et témoins de portées (Ccm2fl/fl). Les animaux Cdh5-CreErt2 et Ccm2fl/fl ont déjà été décrits19.
2. Dissoudre le 4HT dans de l’éthanol à 100 % et le conserver à -80 °C dans des aliquotes de 30 μL de 4-hydroxytamoxifène(4HT) (concentration : 10 mg/mL). Le jour de l’utilisation, diluer le 4HT aliquote dans de l’huile de maïs (0,5 mg/mL).
3. Injecter par voie intragastrique 50 μL de 4HT (0,5 mg/mL) à des petits nouveau-nés à P1 pour induire des lésions expérimentales de la CCM à l’aide d’une seringue à insuline.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
4-hydroxy tamoxifène	Sigma-Aldrich	N° H6278	Pour activer Cdh5-CreErt2
Huile de maïs	Sigma-Aldrich	Réf. C8267-500ML	Pour diluer le 4-hydroxy tamoxifène
Seringue à insuline