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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Induire l’anesthésie
- Anesthésier la souris avec de la kétamine (125 mg/kg) et de la xylazine (10 mg/kg) injectées par voie intrapéritonéale.
2. Surveillance des signes vitaux toutes les 15 min
- Surveillez la température, la fréquence respiratoire et la couleur de la peau. La souris doit être chaude au toucher. La peau doit apparaître rose et bien perfusée. La fréquence respiratoire doit varier de 50 à 70 respirations par minute.
3. Procédures pré-chirurgicales
- Pesez toutes les souris la veille de l’induction de la blessure.
- Stériliser un ensemble d’instruments chirurgicaux par autoclave pour chaque sujet expérimental. Stérilisez le dispositif à percussion avant utilisation.
- Préparez une cage de récupération en plaçant une cage propre sur un coussin chauffant électrique réglé sur le réglage « bas » et positionné de manière à ce que les souris puissent s’éloigner de la chaleur une fois qu’elles se déplacent en mouvement.
- Installez le bloc opératoire dans une hotte à flux laminaire stérilisée.
- Positionnez le cadre de commande stéréotaxique.
- Fixez le dispositif d’impact au cadre stéréotaxique.
- Réglez le dispositif d’actionnement avec les paramètres biomécaniques souhaités pour la vitesse et le temps de séjour.
note: Dans ce protocole, une lésion cérébrale grave est décrite à l’aide d’une pointe d’impact de 3 mm de diamètre via une craniectomie de 5 mm de diamètre avec une vitesse réglée à 2,5 m/s et un temps de séjour de 0,1 s. Un large éventail de paramètres biomécaniques peut être utilisé pour induire le spectre complet des traumatismes crâniens.
- Enfilez un nouvel équipement de protection individuelle et des gants stériles.
- Rasez la fourrure du site opératoire à l’aide d’une tondeuse électrique.
- Appliquez une pommade ophtalmique protectrice sur les yeux de la souris pour prévenir les lésions et le dessèchement de la cornée.
- Placez la souris dans la salle d’opération.
- Préparez la peau avec un gommage chirurgical à base d’iode alterné avec de l’alcool trois fois.
4. Application de l’impact cortical contrôlé
- Incisez le cuir chevelu de 1 cm sur la ligne médiane avec un scalpel en exposant le crâne.
- Positionnez la souris dans un cadre opératoire stéréotaxique en fixant les os temporaux bilatéraux entre des barres d’oreille miniatures et en verrouillant les incisives à l’intérieur d’une pince d’incisive, créant ainsi un maintien stable en trois points sur la tête de la souris.
- Rétractez le cuir chevelu loin du site opératoire à l’aide d’un hémostatique ou d’une pince à verrouillage pour vous assurer que le cuir chevelu n’entre pas en contact avec le foret pendant la craniectomie.
- Identifier les sutures sagittales et coronales sur le crâne exposé.
note: Ce protocole centre la craniectomie à 2 mm à gauche de la suture sagittale et à 2 mm rostrale à la suture coronale.
- Effectuez une craniectomie à l’aide d’une perceuse avec un foret à trépan.
- Pour effectuer la craniectomie, activez d’abord la perceuse à vitesse maximale, puis appliquez le foret à trépan perpendiculaire au crâne sur le site de la craniectomie.
- Appliquez une pression douce et uniforme sur la perceuse une fois le contact établi avec le crâne. Un léger « don » se fera sentir une fois que la perceuse aura pénétré à travers le crâne. Ne pénétrez pas dans le dura.
sous-jacent
note: Ce protocole utilise un foret à trépan de 5 mm pour effectuer la craniectomie.
- À l’aide d’une pince et d’une aiguille hypodermique de petit calibre, vous pouvez retirer le lambeau osseux et exposer complètement la dure-mère sous-jacente.
- Faites pivoter l’extrémité de l’impacteur dans le champ opératoire et abaissez-la jusqu’à ce qu’elle entre en contact avec la dure-mère exposée. Une fois le contact établi, le capteur de contact de l'instrument émettra une tonalité audible pour alerter le chirurgien qu'un contact a été établi. Cela marquera le point zéro à partir duquel la profondeur de déformation est définie.
note: Ce protocole utilise une pointe d’impact de 3 mm pour générer une blessure grave. Des pointes aussi petites que 1 mm peuvent être utilisées pour appliquer des blessures plus localisées.
- Rétractez l’embout d’impact et réglez la profondeur d’impact souhaitée en abaissant la position de l’impacteur sur le cadre stéréotaxique.
note: Dans ce protocole, nous décrivons une blessure grave en fixant la profondeur de déformation à 2 mm.
- Appliquez la blessure en activant l’impacteur sur le dispositif d’actionnement.
- Faites pivoter l’appareil d’impact hors du champ et retirez l’animal du cadre stéréotaxique.
5. Fermeture du site opératoire
- Contrôlez les saignements du crâne et de la surface corticale blessée à l’aide d’une pression directe à l’aide d’un applicateur stérile à embout de coton.
- Séchez le crâne à l’aide d’un applicateur stérile à embout de coton.
- Fermez le cuir chevelu sur la craniectomie à l’aide d’un adhésif chirurgical disponible dans le commerce ou d’une suture monofilament.
note: Dans ce protocole, un adhésif chirurgical vétérinaire est utilisé pour fermer le cuir chevelu. Le lambeau osseux n’est pas remplacé et est jeté.
6. Soins postopératoires et suivi
- Administrer une analgésie postopératoire (p. ex., buprénorphine à libération prolongée de 0,1 à 0,5 mg/kg administrée par voie sous-cutanée, fournissant 72 h d’analgésie soutenue).
- Placez l’animal en position latérale de récupération du décubitus dans une cage propre et préchauffée.
- Observez les animaux jusqu’à ce qu’ils soient éveillés et mobiles, puis retournez chaque souris dans sa cage d’origine.
- Assurer le libre accès à la nourriture et à l’eau. L’apport normal de nourriture et d’eau reprend généralement dans les deux heures suivant la blessure.
- Mesurez le poids corporel tous les trois jours tout au long de l’expérience.