Induction d’une hémorragie sous-arachnoïdienne dans un modèle murin par perforation endovasculaire

Résumé

Source : Liu, S., et al. Modèle de perforation endovasculaire pour l’hémorragie sous-arachnoïdienne combiné à l’imagerie par résonance magnétique (IRM).J. Vis. Exp. (2021).

La vidéo démontre l’induction de l’hémorragie sous-arachnoïdienne par perforation endovasculaire dans un modèle murin. Une incision est pratiquée dans la région du cou de la souris anesthésiée pour accéder à l’artère carotide commune et à sa bifurcation. Un filament est inséré dans les artères pour perforer une branche artérielle intracrânienne, induisant une hémorragie sous-arachnoïdienne.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation des animaux

1. Induire l’anesthésie en injectant de la kétamine (70 mg/kg) et de la xylazine (16 mg/kg) par voie intrapéritonéale. Maintenir une température corporelle normale, contribuant à l’induction rapide d’une anesthésie profonde. Testez la sédation adéquate avec un stimulus de douleur, tel qu’un pincement de l’orteil, et vérifiez l’absence de réaction.
2. Rasez soigneusement les poils du cou de la souris avec un rasoir, nettoyez-le avec de l’éthanol à 70 % suivi de bétadine/chlorhexidine, et appliquez 1 % de lidocaïne sur la surface de la peau pour contrôler la douleur locale.
3. Placez la souris en position couchée. Utilisez du ruban adhésif pour fixer les membres et la queue, en étirant doucement la peau du cou du côté opposé de la chirurgie. En même temps, élevez légèrement le cou.
4. Utilisez une pommade ophtalmique (par ex. du dexpanthénol à 5 %) pour prévenir la déshydratation des yeux pendant l’opération.

2. Induction SAH

1. Ouvrez la peau du cou avec un scalpel stérile, du menton au bord supérieur du sternum (1,5 cm), et séparez brutalement les glandes salivaires de leur tissu conjonctif environnant.
2. Séparez le groupe musculaire le long d’un côté [dans ce cas, le côté droit] de la trachée, exposant la gaine de l’artère carotide commune (ACC) recouverte de vaisseaux sanguins et de veinules nourrissants. L’ACC et les nerfs sont situés à proximité l’un de l’autre.
3. Dissocier la CCA et laisser une avance libre de 8-0 Suture en soie autour de l’ACC sans le ligaturer au préalable. Faites attention à la protection du nerf vague, car il est facilement endommagé (Figure 1A).
4. Une triple bifurcation de l’ACC, de l’artère carotide interne (ICA) et de l’artère carotide externe (ECA) est visible le long du tiers inférieur postérieur du diastasis. Disséquez l’extrémité distale de l’ECA et ligaturez le vaisseau deux fois plus distaally que possible.
5. Déconnectez l’ECA au milieu du segment deux fois ligaturé, créant ainsi un moignon de vaisseau.
6. Prédisposez une ligature pour le filament autour de la souche ECA, ne la fermez pas tant que l’insertion du filament n’a pas réussi.
7. Utilisez une suture ou un micro-clip pour occlure temporairement l’ICA et l’ACC (Figure 1B).
8. Faites une petite incision (environ la moitié du diamètre de l’ECA) dans l’ECA à l’aide de ciseaux microvasculaires. Insérez un filament de prolène 5-0 (ou 4-0) dans l’ECA et avancez-le dans l’ECA.
9. Fermez légèrement la ligature de l’ECA tout en desserrant le micro-clip de l’ICA et du CCA (Figure 1C).
10. Tirez doucement sur le filament et ajustez le moignon ECA dans la direction crânienne, en invaginant le filament par la bifurcation dans l’ICA (Figure 1D).
11. Pointez l’extrémité du filament vers le milieu à un angle de ~30° par rapport à la ligne médiane trachéale et de ~30° par rapport au plan horizontal. Poussez le filament vers l’avant à l’intérieur de l’ICA. Après avoir atteint la bifurcation de l’artère cérébrale antérieure (ACA) et de l’artère cérébrale moyenne (MCA), une résistance est rencontrée (~9 mm).
12. Avancez le filament de 3 mm plus loin, en perforant l’ACA droit. Retirez rapidement le filament vers le moignon ECA, permettant au sang de circuler dans l’espace sous-arachnoïdien.
13. Maintenez le filament dans cette position pendant environ 10 s (Figure 1E). La présence de tremblements musculaires, de myoses ipsilatérales, de respiration haletante, d’altération du rythme cardiaque et d’incontinence urinaire peut être une preuve de réussite de la chirurgie.
14. Fermer temporairement le CAC pour éviter une perte de sang excessive. Retirez le filament instantanément et ligaturez l’ECA avec la suture préétablie. Rouvrir l’ACC et permettre la reperfusion et l’épanchement ultérieur du sang dans l’espace sous-arachnoïdien (Figure 1F).
15. Après avoir vérifié s’il y a des fuites de saignement, désinfectez la peau entourant la plaie pour prévenir les infections cutanées postopératoires et suturez la plaie avec une suture en fibre de polyester 4-0 non résorbable.
16. Placez la souris dans une boîte thermique jusqu’à ce que la conscience soit retrouvée. Attendez que l’animal soit complètement réveillé et assurez-vous qu’il a repris suffisamment de conscience pour maintenir sa décubitus sternal. Ne retournez pas les animaux en compagnie d’autres souris avant qu’ils ne soient complètement rétablis.
17. Administrer 200-300 mg/kg de paracétamol pour soulager la douleur postopératoire.
18. Vérifiez les souris tous les jours après la chirurgie.

Résultats

Figure 1 : Images étape par étape de la technique chirurgicale.(A) Représentation de l’anatomie de l’artère carotide droite exposée : l’ACC et sa bifurcation en ICA et ECA sont identifiées, ainsi que les petites branches de l’ECA (OA et STA). (B) L’ECA est mobilisée à partir du tissu environnant et ligaturée avec deux sutures avant de la couper. Une troisième ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Crème pour les yeux	Bayer	815529836	Bepanthen
Suture de ligature (5-0)	Smi		Soie noire USP
Source lumineuse pour microscope	Zeiss	CL 6000 à DEL
kétamine	CP-pharma	Référence 797-037	100 mg/mL
Paracétamol (40 mg/mL)	bene Arzneimittel	4993736
Filament de prolène (5-0)	Erhicon	EH7255
rasoir	Wella	HS61
Instrument chirurgical (ciseaux fins)	Le	Référence 14060-09
Instrument chirurgical (forceps#1)	AESCULAP	FM001R
Instrument chirurgical (forceps#2)	AESCULAP	FD2855R
Instrument chirurgical (pince #3)	Hammacher	HCS 082-12
Instrument chirurgical (porte-aiguille)	Le	Référence 91201-13
Instrument chirurgical (ciseaux à ressort Vannas)	Le	Référence 15000-08
Microscope chirurgical	Zeiss	Stemi 2000 C
Suture de blessure(4-0)	Erhicon	Réf. CB84D
Xylavet	CP-pharma	Référence 797-062	20 mg/mL