Procédé pour infliger une lésion cérébrale traumatique à la tête fermée chez la drosophile

Dans cet article

Résumé

Source : Katzenberger, R. J., et al., Une méthode pour infliger une lésion cérébrale traumatique à la tête fermée chez Drosophila. J. Vis. Exp. (2015).

La vidéo montre l’utilisation d’un dispositif de traumatisme à fort impact (HIT) pour induire un traumatisme crânien fermé (TCC) chez Drosophila. Les traumatismes crâniens provoquent des traumatismes cérébraux mécaniques qui affectent la fonction neuronale, ce qui, au fil du temps, conduit à la neurodégénérescence et à la mortalité.

Protocole

1. Construction du dispositif HIT

Fixez le ressort à la planche à l’aide de deux pinces et de quatre vis (Figure 1A). Centrez les pinces par rapport à la largeur de la planche et fixez-les les unes contre les autres avec la pince extérieure au ras du bord de la planche. Avant de fixer les pinces, pliez-les à l’aide d’une pince pour qu’elles soient bien ajustées sur le ressort.
REMARQUE : Voir Tableau 1 pour les descriptions des matériaux nécessaires à la construction de l’appareil HIT. L’extrémité serrée du ressort doit être à 1/8 de pouce (3,2 mm) du bord de la carte, et l’extrémité libre doit s’étendre sur la planche de 3/4 de pouce (19 mm). Ajustez le ressort de manière à ce qu’il soit parallèle à la longueur de la planche.
Enroulez une fois l’extrémité libre du ressort autour de la bande adhésive de boucles velcro. Le bord extérieur du velcro doit affleurer l’extrémité du ressort. Le velcro est important car il est utilisé pour fixer le flacon au ressort en créant un ajustement à compression serré. Le velcro permet également de connecter et de retirer facilement les flacons, ce qui permet de traiter de nombreux flacons en peu de temps.
Placez le couvercle du seau à glace à l’envers, centré, serré contre la planche de bois. Orientez la région en relief du couvercle du seau à glace de manière à ce que le bord long soit parallèle à la largeur de la planche. Notez que la région surélevée du seau à glace est plus haute de 1/2 pouce (13 mm) que la planche en bois, de sorte que lorsqu’une fiole est fixée au ressort, le ressort ne repose pas à plat sur la planche.
Faites glisser l’ensemble de l’appareil contre un objet fixe tel qu’un mur, de sorte que le couvercle du seau à glace soit coincé entre la planche et l’objet et ne bouge pas.
Collez le rapporteur de papier au fond d’un plateau de flacons en carton et placez-le sur le bord contre la longueur du panneau de sorte que le repère de 90° soit aligné avec le ressort lorsqu’il est ramené dans une position parfaitement verticale.

2. Fonctionnement de l’appareil HIT

Placez entre 1 et 60 mouches anesthésiées au CO₂ dans un flacon vide et bouchez le flacon à l’aide d’une boule de coton bien ajustée.
Confinez les mouches au fond à 1 pouce (2,5 cm) de la fiole en poussant la boule de coton dans la fiole jusqu’à ce qu’elle soit à 1 pouce (2,5 cm) du bas. Il est utile de tracer une ligne sur le flacon à 1 pouce (2,5 cm). Notez que le fait de confiner les mouches dans des régions plus ou moins grandes du flacon peut affecter la gravité des phénotypes.
Attendez 5 min que les mouches récupèrent leur mobilité grâce au CO₂. Notez qu’il n’est pas connu si 5 min sont suffisants pour éliminer complètement les effets du CO₂.
Insérez l’extrémité du ressort dans le flacon jusqu’à ce que le bord intérieur du velcro affleure le haut du flacon (Figure 1B). Lorsque le ressort est à plat, 1 pouce (2,5 cm) de la fiole doit chevaucher la région soulevée du couvercle du seau à glace. Les flacons peuvent être réutilisés plusieurs fois.
En position assise, tenez la fiole au niveau du velcro à l’aide du pouce et de l’index de votre main gauche. Tenez la planche fermement contre le plan de travail à l’aide de votre main droite. Vous pouvez également utiliser des pinces en C pour maintenir la planche fermement sur le plan de travail.
Tirez le ressort parfaitement droit vers l’arrière à l’angle souhaité. Relâchez le ressort. Laissez le ressort s’arrêter complètement.
Retirez le flacon de la source et laissez les mouches récupérer pendant ≥5 min. Soumettez les mouches à une autre frappe ou transférez-les dans un flacon contenant de la nourriture pour mouches.
NOTE : Une variété de tests peut être utilisée pour évaluer les effets phénotypiques des frappes du dispositif HIT. Par exemple, les effets sur la longévité peuvent être déterminés en analysant le pourcentage de mouches qui survivent parfois après une blessure, les effets sur la morphologie du cerveau peuvent être déterminés par l’analyse histologique de la tête et les effets sur l’expression génique peuvent être déterminés par l’analyse quantitative des niveaux d’ARNm.
Déterminer les effets de la procédure qui ne sont pas dus à des impacts en traitant de manière identique les mouches témoins qui ne sont pas soumises à des impacts. Portez une protection auditive car l’impact du flacon contre le couvercle du seau à glace produit un bruit fort.

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Résultats

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Figure 1 : schéma de l’appareil HIT. (A) Illustration de la vue de dessus de l’appareil HIT en position de repos. (B) Illustration de la vue latérale de l’appareil HIT. Le ressort est représenté en position de repos (rouge foncé) et dévié à 90° (rouge clair).