Microdialyse du liquide interstitiel d’un cerveau de souris pour isoler des protéines extracellulaires

Résumé

Source : Yamada, K. Méthode de microdialyse in vivo pour collecter de grandes protéines extracellulaires à partir de liquide interstitiel cérébral avec des sondes de coupure de haut poids moléculaire. J. vis. exp. (2018)

La vidéo montre le processus d’utilisation d’une sonde de microdialyse pour collecter des protéines extracellulaires du liquide interstitiel (ISF) du cerveau d’une souris. Une sonde de microdialyse, équipée d’une membrane semi-perméable de coupure de haut poids moléculaire, est insérée dans le cerveau d’une souris anesthésiée via une canule guide implantée. La sonde, reliée à des pompes, permet à un tampon physiologique de perfuser le tissu cérébral et de se mélanger à l’ISF. Les protéines de l’ISF diffusent à travers la membrane semi-perméable et sont collectées pour analyse.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Procédure pré-chirurgicale

1. Avant de commencer l’opération, essuyez le tout avec de l’éthanol à 70 % pour maintenir des conditions stériles. Il est recommandé d’utiliser un coussin chauffant à l’aide d’un coussin chauffant.
2. Anesthésier les souris par injection intrapéritonéale d’hydrate de chloral (400 mg/kg). L’utilisation de méloxicam SR lors de l’induction et de buprénorphine dès le rétablissement deux fois pa....

Résultats

Figure 1 : Configuration chirurgicale et construction des circuits de microdialyse. (A) Mettre en place un ensemble stéréotaxique pour une implantation de guide à l’aide d’un écrou borgne, d’un adaptateur stéréotaxique et d’une canule de guidage. (B) Chirurgie stéréotaxique pour implanter une canule guide. La canule guide est insérée dans le cerveau à 12 degrés par rapport à l.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Le microéchantillonneur Univentor 820	Univentor	8303002	Collecteur de fractions réfrigéré
Pompe à seringue	KD scientifique	KDS-101
Pompe à rouleaux	Microdialyse Eicom	ERP-10
Système autonome Raturn	BASi	MD-1409	Système en mouvement libre
Kit de cage à deux espèces	BASi	CX-1600
Sonde de microdialyse AtmosLM (longueur de la tige 8 mm, longueur de la membrane 2 mm)	Microdialyse Eicom	PEP-8-02	La longueur de l’arbre d’une sonde, d’un guide, d’une sonde Dumy et d’un adaptateur stéréotaxique doit être identique.
Guide de microdialyse (longueur de la tige 8 mm)	Microdialyse Eicom	PEG-8
Sonde factice de microdialyse (longueur de la tige 8 mm)	Microdialyse Eicom	PED-8
Vis à os	BASi	MD-1310
Super bond C&B set	Sunmedical		Ciment dentaire
Instrument stéréotaxique pour petits animaux avec console d’affichage numérique	Kopf	Modèle 940	Appareil stéréotaxique
Adaptateur souris et rat nouveau-né	Stoelting	51625
Barres d’oreille standard et embouts en caoutchouc pour souris stéréotaxique	Stoelting	51648
Solution d’albumine de sérum bovin	Sigma	A7284-50ML	Solution BSA à 30 %
Tube FEP (70 cm)	Microdialyse Eicom	JF-10-70	Volume interne = 0,5 μL/cm
Tube en téflon (50 cm)	Microdialyse Eicom	JT-10-50	Volume interne = 0,08 μL/cm
Métro de Byton	Microdialyse Eicom	JB-30
Adaptateur Luer Stab Intramedic 23G	BD	427565	Aiguille à extrémité arrondie
Tube à rouleaux	Microdialyse Eicom	RT-5S	Volume interne = 4 μL
Écrou d’achèvement	Microdialyse Eicom	AC-5
Tube de microcentrifugation de 0,25 mL avec bouchon	QSP	503-Q	Tubes pour collecteur de fractions
Adaptateur stérotaxique (longueur de l’arbre 8 mm)	Microdialyse Eicom	PESG-8
Aiguille de connexion	Microdialyse Eicom	RTJ
Collier de souris	BASi	MD-1365
Kit de micromoteur rotatif à grande vitesse	FOREDOM	K.1070	Perceuse
Picrotoxine	Sigma	P1675
Tournevis pour vis à os
Scalpel
Coton-tige
Tondeuse chirurgicale