Stimulation des neurones sensoriels du ganglion de la racine dorsale à l’aide d’un agoniste du récepteur neuropeptide

Résumé

Source : Lin, Y., et al., Isolement des ganglions de la racine dorsale et culture primaire pour étudier la libération de neurotransmetteurs. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo démontre l’utilisation de cellules ganglionnaires de la racine dorsale transfectées pour étudier la libération de neurotransmetteurs en les stimulant avec un agoniste des récepteurs neuropeptidiques.

Protocole

1. Libération de neurotransmetteurs à partir des cellules DRG primaires

1. Le jour 6, après la mise en plaque des cellules (72 h après la transfection de l’ARNi), changez le milieu de culture en milieu sans sérum de 200 μL et incubez les cellules dans un incubateur à 37 °C CO₂ pendant 30 min.
2. Ajouter 1 μL de produit chimique de stimulation et mélanger délicatement le milieu par pipetage. Incuber la parabole dans un incubateur à 37 °C CO₂ pendant la durée indiquée.
   REMARQUE : Dans cet article, les cellules cultivées ont été stimulées avec l’agoniste NPFFR2, dNPA (D.Asn-Pro-(N-Me)Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Gln-Arg- Phe-NH2, 5 nmol), pendant 1 h.
3. Prélever le milieu de culture dans la boîte de culture et centrifuger à 5 000 x g pendant 5 min à 4 °C pour éliminer toutes les impuretés en suspension.
4. Prélever le surnageant de la centrifugation et diluer les échantillons avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) si nécessaire. Ensuite, utilisez des kits d’immunodosage enzymatique (EIA) pour doser les niveaux de neurotransmetteurs.
   NOTE : Ici, les surnageants ont été dilués 1:100 avant d’analyser le niveau de CGRP. Le surnageant n’a pas été dilué avant d’analyser le niveau de SP.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DMEM-F12	Invitrogen	12400024	Milieu culturel
La solution saline équilibrée de Hank	Invitrogen	14170-112	Culture Médium
Pipette Pasteur	Hilgenberg	3150102	Trituration cellulaire
dNPA	Synthèse Genemed	N/A	Agoniste NPFFR2