Test d’escalier pour l’évaluation de la fonction motrice chez un rat hémiparkinsonien

Résumé

Source : Rattka, M, et al., Une nouvelle approche pour évaluer l’issue motrice des effets de la stimulation cérébrale profonde chez le rat hémiparkinsonien : test de l’escalier et du cylindre. J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo montre le test de l’escalier pour évaluer la fonction motrice chez un rat hémiparkinsonien avec une lésion du cerveau droit. La lésion perturbe la signalisation de la dopamine, ce qui nuit au contrôle de la patte gauche, ce qui entraîne une augmentation du nombre de granulés dans l’escalier gauche, ce qui indique un dysfonctionnement moteur.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Test de l’escalier (Figure 1)

1. Phase d’acquisition
   1. Une journée avant la formation, familiarisez les animaux avec les granulés utilisés dans le test de l’escalier.
      1. Facultatif : Pour augmenter la motivation de l'animal, utilisez une restriction alimentaire (10 à 15 g de nourriture de laboratoire standard pour maintenir le poids corporel à 90 % du niveau d'alimentation libre). Cependant, ce n’est pas obligatoire pour obtenir un effet d’entraînement positif. Cette étude a été menée sans restriction alimentaire.
   2. Préparez une boîte d’escalier en verre en plastique transparent (hauteur : 34,5 cm, longueur : 35,5 cm, largeur : 12 cm et compartiment étroit 6 cm) en nettoyant la boîte avec une solution d’acide acétique à 0,1 %. NOTE : La boîte d’escalier est une boîte à deux compartiments avec une plate-forme surélevée et deux escaliers dans le compartiment étroit. Les marches gauches de l’escalier dans le compartiment étroit ne sont accessibles qu’avec la patte gauche, et les marches droites uniquement avec la patte droite.
      NOTE : Les boîtes d’escalier standard se composent de deux compartiments avec un couvercle. S’ils doivent être utilisés pour des expériences avec des rats stimulés par câble, utilisez une boîte haute sans couvercle.
   3. Retirez l’escalier et remplissez les puits à chaque marche avec huit granulés de 45 mg.
   4. Insérez l’escalier et placez huit granulés supplémentaires sur la plate-forme surélevée.
   5. Placez le rat dans la boîte de transport.
   6. Transportez le rat de la cage de la maison à la boîte de l’escalier à l’aide de la boîte de transport.
   7. Placez le rat dans la boîte de l’escalier (Figure 2).
   8. Au bout de cinq minutes, retirez l’animal de la boîte d’escalier et remettez-le dans la cage de la maison à l’aide de la boîte de transport.
   9. Notez combien de granulés ont été mangés sur la plate-forme et (éventuellement) dans les escaliers de droite et de gauche.
   10. Remplissez l’escalier en remplissant les puits à chaque marche avec huit granulés de 45 mg.
   11. Nettoyez la boîte de l’escalier avec une solution d’acide acétique à 0,1 % et placez les granulés supplémentaires sur la plate-forme.
   12. Répétez cette procédure (phase d’acquisition) trois jours de suite.
       NOTE : Toutes les expériences décrites ont été réalisées sur des rats Sprague Dawley mâles. La durée des différents modules de formation peut varier selon les souches de rats, les sexes et les vendeurs.
2. Test au choix libre
   1. Nettoyez la boîte de l’escalier avec une solution d’acide acétique à 0,1 %.
   2. Retirez l’escalier et remplissez les puits à chaque marche avec huit granulés de 45 mg.
   3. Placez le rat dans la boîte de transport.
   4. Transportez le rat de la cage de la maison à la boîte de l’escalier à l’aide de la boîte de transport.
   5. Placez le rat dans la boîte de l’escalier.
   6. Au bout de cinq minutes, retirez l’animal de la boîte d’escalier et remettez-le dans la cage de la maison à l’aide de la boîte de transport.
      Notez combien de granulés ont été mangés dans les escaliers de droite et de gauche.
   7. NOTE : Si les animaux ont toujours des problèmes pour saisir les granulés, ajoutez-en d’autres sur la plate-forme où ils peuvent être facilement atteints.
   8. Remplissez l’escalier en remplissant les puits à chaque marche avec huit granulés de 45 mg.
   9. Nettoyez la boîte de l’escalier avec une solution d’acide acétique à 0,1 % pour l’animal suivant.
   10. Répétez cette procédure (phase de libre choix) trois jours de suite.
       NOTE : Les résultats présentés ont été obtenus par une formation menée sans période de repos entre les modules. Certains groupes préfèrent un jour de repos pour la consolidation, afin de soutenir le processus d’entraînement.
3. Test de choix forcé
   1. Nettoyez la boîte de l’escalier avec une solution d’acide acétique à 0,1 %.
   2. Retirez l’escalier et remplissez les puits sur chaque marche de l’escalier de gauche avec huit (les trois premiers jours du module) ou quatre (trois jours consécutifs du module) des granulés de 45 mg.
      1. Effectuez le test de choix forcé du côté où l’affaiblissement des facultés se produira.
         REMARQUE : Nous effectuons la lésion de Parkinson sur l'hémisphère droit et entraînons donc sélectivement la patte gauche.
   3. Placez le rat dans la boîte de transport.
   4. Transportez le rat de la cage de la maison à la boîte de l’escalier à l’aide de la boîte de transport.
   5. Placez le rat dans la boîte de l’escalier.
   6. Au bout de cinq minutes, retirez l’animal de la boîte d’escalier et remettez-le dans la cage de la maison à l’aide de la boîte de transport.
   7. Notez combien de granulés ont été mangés dans l’escalier de gauche.
   8. Remplissez l’escalier en remplissant les puits à chaque marche avec huit ou quatre granulés de 45 mg (le nombre de granulés dépend du jour de formation).
   9. Nettoyez la boîte de l’escalier avec une solution d’acide acétique à 0,1 % pour l’animal suivant.
   10. Répétez cette procédure (phase de choix forcé) six jours de suite.
4. Acquisition de données
   1. Effectuez l’expérience décrite pour le module à choix forcé (quatre pastilles dans chaque puits de l’escalier de gauche) pendant deux jours consécutifs. Calculez le taux de réussite (nombre de granulés consommés) en moyenne des deux jours.

Résultats

Figure 1 : Configuration de test de l’escalier . La boîte d’escalier disposée avec des granulés sur l’escalier de gauche. (A) vue de côté, (B) vue d’en haut.

Figure 2 : Test de l’escalier. Un rat hémiparkinsonien lors d’un test d’escalier.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîte d’escalier sans couvercle	Glas Keil, Allemagne		sur mesure
Granulés de précision sans poussière, 45 mg	Bio Serv	F0021