Dénervation sympathique des artères rénales dans un modèle murin d’hypertension induite par l’angiotensine II

Résumé

Source : Wang, M., et al., L’amélioration de la dénervation rénale a atténué l’hypertension induite par la perfusion d’angiotensine II. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo montre une procédure de dénervation sympathique de l’artère rénale dans un modèle de souris hypertensive induite par l’angiotensine II, utilisant du phénol pour perturber la fonction nerveuse sympathique et réduire la pression artérielle.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Dénervation rénale bilatérale

1. Sélectionnez les souris présentant une pression artérielle élevée (PA) ≥140/90mmHg ou une augmentation de 25 % de la PA systolique/PA diastolique, 1 semaine après la perfusion d’Ang II.
2. Enregistrez le poids de l’animal avant l’opération et choisissez des animaux d’un poids minimum de 24 g pour la chirurgie de dénervation rénale.
3. Anesthésier les souris à l’aide de pentobarbital sodique. Confirmez la profondeur de l’anesthésie avec un réflexe de pincement négatif des orteils.
4. Retirez les poils de l’abdomen avec un rasoir. Effectuez cette procédure avec soin et minutie pour éviter toute contamination chirurgicale.
5. Placez les souris sur la table d’opération, en gardant l’abdomen vers le haut, et fixez ses membres avec du ruban adhésif. Désinfectez la peau abdominale avec de la povidone iodée, suivie de trois lingettes avec de l’éthanol à 70 %.
6. Faites une incision abdominale ventrale médiane de 2 cm à l’aide d’une lame de scalpel. Tirez l’intestin vers l’arrière avec de la gaze imbibée d’une solution saline à 37 °C pour exposer l’artère rénale gauche. Disséquez soigneusement mais brutalement la graisse de l’artère rénale à l’aide d’une pince à épiler incurvée. (Figure 1A-C).
7. Coupez le papier de pesée en un rectangle de la même taille que l’artère rénale avec des ciseaux tranchants stériles. Pour référence, coupez le papier de pesée de la même taille que celle indiquée par la ligne pointillée dans Figure 1C.
   REMARQUE : C’est une partie critique de la chirurgie d’essayer de couper plusieurs morceaux de papier de pesée à la fois pour garder la même forme.
8. Trempez le papier pesée dans une solution à 10 % de phénol/éthanol pendant au moins 30 s. Couvrez la surface de l’artère rénale gauche et enveloppez le récipient avec le papier de pesée, en le gardant pendant 2 min (Figure 1D). Utilisez de la gaze pour protéger les tissus environnants afin d’éviter que le papier de pesée ne touche les reins et l’intestin environnants.
   REMARQUE : La solution de phénol est stable dans les tubes en plastique mais pas dans les flacons en verre. Par conséquent, la solution doit être fraîchement préparée pour chaque expérience.
9. Effectuez la même procédure pour l’artère rénale droite. Effectuez la chirurgie simulée avec du papier de pesée immergé dans une solution saline.
10. Repositionnez les muscles dans leur position initiale et fermez le péritoine avec des sutures 6-0 Vicryl dans une suture interrompue. Ensuite, fermez la peau avec des sutures en nylon 4-0 interrompues. Surveillez toutes les souris jusqu’à ce qu’elles soient complètement rétablies.

2. Soins postopératoires

1. Appliquez de la povidone iodée sur l’incision et placez l’animal dans une couverture électrique chauffée pour la récupération et le suivi postopératoire.
2. Surveillez les souris deux fois par jour pour évaluer la rougeur, l’enflure et la douleur ou l’infection abdominale. Administrez du méloxicam (0,5 mg/kg, SC) à toutes les souris environ 1 h avant et 24 h après la procédure de NDR.

Résultats

Figure 1 : Procédure de RDN avec du papier de pesée. (A,B) Images anatomiques de l’artère rénale de souris C57BL/6 (ex vivo). (C) La partie à l’intérieur des deux lignes pointillées fait référence à la zone couverte par le papier de pesée. (D) Couvrir la surface de l’artère rénale bilatérale avec le papier de pesée approprié immergé dans un...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Angiotensine II	Sangon Biotech	CAS :4474-91-3	Pour créer un modèle d’animol hypertendu
Analyse de la pression artérielle	Visitech Systems	BP-2000	Mesurer la pression artérielle des souris
Mini-pompe osmotique	Société DURECT	CA 95014	Pour remplir avec de l’angiotensine II
Papier de pesée	Sangon Biotech	F512112	Pour détruire le nerf rénal avec du papier de pesée immergé dans du phénol ; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.