Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Mise en place d’un modèle unilatéral d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO/R) chez le rat
REMARQUE : Pendant l’opération, utilisez doucement les micropinces pour éviter la rupture du vaisseau sanguin. Évitez d’endommager les nerfs et les autres vaisseaux sanguins du cou du rat lorsque le vaisseau est isolé. Il faut prendre soin de présenter une technique d’asepsie appropriée pour toutes les interventions chirurgicales de survie. La technique illustrée plus loin dans la vidéo doit être pratiquée tout au long de la procédure.
- Tout au long de la chirurgie, maintenez la température corporelle des rats à 37,0 ± 0,5 °C dans un thermostat pour petit animal. Préparez quatre sutures 5-0 de 6 cm.
- Régler le débit d’oxygène d’un appareil d’anesthésie pour petits animaux (avec un dispositif de traitement des gaz résiduaires) à 0,4−0,6 L/min et la concentration d’isoflurane à 5 %. Placez le rat dans l’appareil d’anesthésie.
- Une fois que l’animal s’est évanoui, placez le rat sur une table de fixation chirurgicale. Connectez la bouche du rat au masque de l’appareil d’anesthésie (le débit d’oxygène reste inchangé ; ajustez la concentration d’isoflurane à 3 %). Confirmez que l’animal est entré en anesthésie profonde en observant une absence de tension aux extrémités, de réflexes cornéens et de douleur.
- Fixez ses membres pour qu’ils s’allongent sur la table d’opération avec des bandages en papier (ou d’autres outils).
- Retirez le cou avec un rasoir électrique et stérilisez-le avec de l’alcool à 75 % (l’iodophor est meilleur). Fixez la gueule du rat avec un crochet.
- Coupez 2 à 3 cm le long de la forme longitudinale centrale du cou avec des ciseaux ophtalmiques.
- Séparez l’artère carotide commune. Séparez le muscle sous-cutané à l’aide d’une pince ophtalmique. Utilisez un écarteur fait maison pour exposer complètement le champ de vision. Après avoir séparé le muscle antérieur de la trachée à l’aide d’une pince ophtalmique, séparez-le le long du tendon sterno-cléido-mastoïdien droit jusqu’à ce que l’artère carotide commune soit visible.
- Isolez l’artère carotide commune, l’artère carotide externe et l’artère carotide interne à l’aide d’une pince ophtalmique. Lister l’artère carotide commune (nœud dur), l’artère carotide externe loin de l’extrémité du cœur (nœud dur) et l’artère carotide interne (nœud lâche) avec des sutures 5-0. Tapissez l’artère carotide externe près de l’extrémité du cœur avec des sutures 5-0.
- Insérez un boulon fileté. Découpez une petite ouverture dans l’artère carotide externe à l’aide de ciseaux ophtalmiques et insérez doucement un boulon fileté. Lissez la suture de l’artère carotide externe qui a été dans un nœud lâche et coupez l’artère carotide externe.
- Desserrez le nœud lâche de l’artère carotide interne et continuez à insérer le boulon fileté au début de l’artère cérébrale moyenne (suture marquée). Ensuite, coupez le boulon fileté exposé.
- Une fois le temps ischémique atteint (2-3 h), fixez la fracture de l’artère carotide externe avec une micropince et retirez doucement le boulon fileté avec une autre micropince. Lorsque l’extrémité avant du boulon fileté est complètement retirée de l’artère carotide interne, ligaturez l’artère carotide externe qui était doublée de sutures 5-0, puis retirez complètement le boulon fileté.
- Desserrez l’artère carotide commune et étalez ~50 000 U de poudre de pénicilline sodique sur la surface de la plaie pour prévenir l’infection. Suture des muscles sous-cutanés et de la peau avec 4 sutures.
- Donnez ~0,2 mL de solution saline stérile au rat par voie orale à l’aide d’une seringue de 1 mL (l’injection de SQ-PEN est préférable) pour prévenir le manque d’eau postopératoire après avoir remis le rat dans la cage.