Obtention d’une suspension unicellulaire à partir de tissu cérébral de rat congelé

Résumé

Source : Rubio, F. J., et. al. Tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) et analyse de l’expression génique des neurones exprimant Fos à partir de tissus cérébraux de rats frais et congelés. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo démontre la dissociation de tissu cérébral de rat congelé en une suspension unicellulaire par digestion enzymatique et trituration mécanique. Les cellules préparées sont fixées et perméabilisées à l’éthanol pour des applications en aval telles que la cytométrie en flux ou l’analyse de l’expression génique.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et l’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation avant le prélèvement de tissus

1. Réglez la centrifugeuse sur 4 ^oC.
2. Polir au feu un ensemble de trois pipettes Pasteur en verre avec des diamètres décroissants d’environ 1,3, 0,8 et 0,4 mm pour chaque échantillon.
3. Préparez des tubes étiquetés de 1,7 ml contenant 1 ml de tampon A froid et conservez les tubes sur de la glace.
4. Préparez un bac à glaçons contenant la matrice de tranchage du cerveau, des....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Matrice cérébrale	CellPoint Scientific	69-2160-1	Pour obtenir des tranches de cerveau coronaire
Hibernation A faible fluorescence	Morceaux de cerveau	HA-lf	Le tampon A' dans le protocole est utilisé pour le traitement des tissus et des cellules de la dissociation aux étapes de fixation
Accutase	Millipore	SCR005	La solution enzymatique » dans le protocole est utilisée pour la digestion enzymatique des tissus avant la trituration
Crépine cellulaire, 40 μm	BD Faucon	352340	Pour filtrer la suspension de cellule
Crépine cellulaire, 100 μm	BD Faucon	352360	Pour filtrer la suspension de cellule
Falcon 5 ml tube à essai en polystyrène à fond rond avec capuchon à pression pour crépine de cellules	BD Bioscience	352235	Pour filtrer la suspension cellulaire avant de passer dans le cytomètre en flux
Pasteur Pipet, Verre	Approvisionnement NIH	6640-00-782-6008	Pour faire une trituration tissulaire