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Article de méthode

Évaluation de l’état de palmitoylation des protéines de la membrane cellulaire du tissu cérébral de la souris

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8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Speca, D. J., et al. Essai de décalage de gel d’échange d’acyl-PEGyle pour la détermination quantitative de la palmitoylation des protéines de la membrane cérébrale. J. Vis. Exp. (2020).

La vidéo montre l’analyse de l’état de palmitoylation de protéines membranaires cellulaires isolées de tissu cérébral de souris. Le processus consiste à exposer les cystéines non palmitoylées et à les bloquer, puis à utiliser un polymère qui se lie aux cystéines palmitoylées, ce qui aide à évaluer l’état de palmitoylation des protéines isolées.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Préparation des membranes cérébrales de souris

  1. Décapiter la souris à l’aide d’un appareil à guillotine et disséquer rapidement le cerveau (en <1 min, si possible, pour minimiser les changements de palmitoylation qui peuvent se produire pendant la procédure de dissection). Homogénéiser immédiatement dans 10 mL de tampon d’homogénéisation (Tableau 1) dans un homogénéisateur en verre (~12 coups) sur glace.
  2. Centrifuger les lysats pendant 15 min à 1 400....

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Résultats

Tableau 1 : Solutions utilisées pour le dosage APEGS. Le tampon d’homogénéisation et le tampon A peuvent être préparés à l’avance ; cependant, ajoutez des inhibiteurs de protéase et du fluorure de phénylméthylsulfonyle (PMSF) immédiatement avant l’utilisation. Toutes les autres solutions doivent être préparées fraîches.

Zone tamponCo.......

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Hydroxylamine (HAM) ThermoFisher 26103
Methoxy-PEG-(CH2)3NHCO(CH2)2-MAL (mPEG)NOFME-050MAMW ~5000 kDa
MicrofugeEppendorf5415Rou équipement équivalent
N-éthylmalémide (NEM)Calbiochem34115Hautement toxique
Imageur optique pour la densitométrieAzure BiosystemsImageur biomoléculaire Sapphireou équipement équivalent
Tubes en polypropylène avec bouchonFisher Scientific14-956-1D
Pipettes sérologiques (verre)Fisher Scientific13-678-27D
Centrifugeuse de tableBeckmanAllegra X-15Rou équipement équivalent
Chlorhydrate de tris(2-carboxyéthyl)phosphine (TCEP)EMD Millipore580560

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