Fabrication de microbilles de polymère libérant de la bêta-amyloïde pour la modélisation de la maladie d'Alzheimer

Résumé

Source : Almari, B., et al. Fabrication de microbilles d'alginate sécrétant de l'amyloïde β pour une utilisation dans la modélisation de la maladie d'Alzheimer. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo fait la démonstration d’une méthode de fabrication de microbilles de polymère qui encapsulent des cellules neurotoxiques sécrétant de la bêta-amyloïde. La suspension cellule-polymère est traitée à travers un dispositif de fabrication de microbilles, la gélification du polymère étant obtenue par réticulation du calcium, formant des microbilles sphériques autour des cellules. Le polymère permet la prolifération cellulaire tout en permettant une libération contrôlée et à long terme de bêta-amyloïde, simulant son accumulation dans la maladie d'Alzheimer.

Protocole

1. Préparatifs

1. Préparez 100 mL de solution mère d’alginate à ~4 % (p/v).
   1. Peser 4,4 g de sel d’alginate sodique et ajouter la poudre sèche à 100 mL de solution saline tamponnée HEPES (HBS, 20 mM d’acide hydroxyéthylpipérazine éthane sulfonique [HEPES] (0,477 g) avec 150 mM de NaCl (0,877 g) dans de l’eau déminéralisée permettant l’hydratation.
   2. Utilisez un agitateur magnétique à ~500 tours par minute (tr/min) et chauffez jusqu’à 50 °C pour permettre une hydratation complète de l’alginate.
      note: L’alginate peut avoir besoin d’une ou deux heures pour être complètement hydraté. Pour gagner du temp....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
0.22 um PES filtre	Merck, Royaume-Uni	SLGP033RS
15mm Netwell insert 74 um filtre à mailles	Constar, États-Unis	#3477
Sel de sodium d’acide alginique d’algues brunes	Sigma-Aldrich,uk	A0682
Chlorure de calcium	Sigma-Aldrich,uk	C1016
CellTiter96 AQueous One Solution essai de prolifération cellulaire	Promega, États-Unis	G3580
Encapsulateur	Inotech	IE-50	N° de série 05.002.01-2005
HEPES	Sigma-Aldrich,uk	N° H4024
Saline tamponnée au phosphate	Sigma-Aldrich,uk	Réf. D1408
Chlorure de sodium	Sigma-Aldrich,uk	433209
Citrate de trispdium dihydraté	Sigma-Aldrich,uk	W302600-K
Solution trypsine-EDTA	Sigma-Aldrich,uk	Réf. T4049