Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.
REMARQUE : Le protocole décrit une procédure de coupe cérébrale bihémisphérique symétrique pour l’évaluation cérébrale post-mortem finalisée pour les études neuropathologiques chez l’homme. Les descriptions détaillées des appareils, des instruments, du matériel et des fournitures nécessaires à l’ablation du cerveau humain seront exclues. Le matériel et les fournitures pour les dissections cérébrales sont choisis à la discrétion de chaque chercheur et sont basés sur des outils d’autopsie autorisés ou approuvés par chaque établissement de recherche. L’ensemble minimal d’outils et de matériaux requis pour cette procédure est décrit dans le tableau des matériaux/équipements. Les procédures spécifiques de coupe et les précautions pour les maladies cérébrales transmissibles suspectées, telles que la MCJ humaine, ne sont pas visées par le présent manuscrit et sont disponibles auprès d’autres sources.
1. Tronçonnage symétrique du cerveau bihémisphérique
Remarque : Assurez-vous que le cerveau a reçu la fixation tissulaire nécessaire (en utilisant, par exemple, du formol à 10 % tamponné neutre) pendant une période de deux à trois semaines, en fonction des conditions périagonales, métaboliques (c’est-à-dire le pH) et de préservation des tissus (c’est-à-dire la température). Cependant, pour les études de corrélation imageur-pathologie, une période de fixation plus longue (>5,4 semaines) a été suggérée.
- Placez le cerveau sur une surface plane face à l’investigateur, avec les pôles frontaux dirigés dans la direction opposée par rapport à l’investigateur.
- Placez le cerveau de manière à permettre une visualisation complète et claire de tous les gyri et sillons corticaux de l’ensemble du cerveau (Figure 1a).
- Tout d’abord, recherchez des anomalies méningées, des asymétries hémisphériques macroscopiques (indicateurs possibles de phénomènes hémisphériques focaux, lobaires ou généralisés d’atrophie), des lésions tissulaires macroscopiques (c’est-à-dire des tumeurs ou une hernie), des malformations congénitales, des anomalies vasculaires et toute autre anomalie possible ou présentation inhabituelle de la surface cérébrale.
note: Pour obtenir des descriptions détaillées de la façon d’évaluer un cerveau humain, reportez-vous aux manuels de neuropathologie et aux manuels d’autopsie disponibles dans le commerce.
2. Séquence de protocole
- Visage pôles frontaux à l’opposé de l’investigateur, avec les aspects superficiels des hémisphères (télencéphale) face à l’investigateur. Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter d’éventuelles macro-anomalies et tenir compte d’éventuelles considérations clinico-neuroanatomiques et post-coupe. Demandez à un assistant de recherche de prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer toute la surface corticale (figures 1a à c).
- Marquez les gyri corticaux pré et postcentraux à l’aide d’encre ou d’aiguilles colorées avant de couper le cerveau (Figure 1b).
note: Cette procédure facilite une reconnaissance plus immédiate des cortex primaires moteurs et somatosensoriels après l’excision.
- Faites pivoter le cerveau de 180 degrés tout en le gardant orienté dans la même direction (c’est-à-dire les pôles frontaux tournés vers l’arrière de l’investigateur). Inspectez soigneusement la base du cerveau. Portez une attention particulière aux conditions des systèmes cérébrovasculaires (c’est-à-dire les artères basilaires et vertébrales et le cercle de Willis) et des nerfs crâniens à leurs niveaux de sortie/entrée du tronc cérébral. Gérez les bulbes et les voies olfactives avec un soin particulier pour éviter la lacération des tissus due à leur extrême fragilité.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter d’éventuelles macro-anomalies et tenir compte d’éventuelles considérations clinico-neuroanatomiques et post-coupe. Demandez à un assistant de recherche de prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer l’intégralité des surfaces corticales et du tronc cérébral.
- Face à la base du cerveau et à l’aide d’un scalpel, coupez le tronc cérébral transversalement au niveau de la partie supérieure du pont (le plus près possible de la base du cerveau). Inspectez soigneusement le SN (c’est-à-dire pour la pâleur) et les autres structures voisines. Prenez note, éventuellement à l’aide d’un appareil d’enregistrement audio, de toute apparence inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal.
- Encore une fois, faites pivoter le cerveau de 180 degrés et, à l’aide d’un couteau bien aiguisé, séparez les deux hémisphères en coupant le corps calleux au centre à travers la fissure longitudinale médiale et en suivant une direction fronto-occipitale. Inspectez chaque côté de chaque hémisphère à la recherche d’anomalies possibles (par exemple, hypertrophies ventriculaires, malformations, ramollissement des tissus, tumeurs, etc.). Voir la figure 2a.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter d’éventuelles macro-anomalies et tenir compte d’éventuelles considérations cliniques, neuroanatomiques et post-coupe. Demandez à un assistant de recherche de prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer toute la surface corticale. Notez toute caractéristique cérébrale inhabituelle par rapport à un cerveau normal.
- Placez les deux hémisphères à plat, couchés sur leurs faces médiales, les lobes frontaux tournés vers l’arrière, comme le montre la figure 2b. Placez-les de manière à ce que leurs centres se touchent (également en cas d’asymétrie hémisphérique marquée).
- À l’aide d’un couteau bien aiguisé, coupez manuellement les deux hémisphères cérébraux, en commençant par les pôles frontaux et en allant vers les pôles occipitaux sur toute la longueur des hémisphères. Obtenez deux séries de blocs de tissu cérébral de 1 cm d’épaisseur (environ 18 plaques pour chaque hémisphère).
- Placez les plaques cérébrales dans une séquence anatomiquement organisée (direction fronto-occipitale) sur une surface plane séparée. Utilisez une surface blanche sur laquelle est imprimée une règle pour un meilleur contraste lors de la photographie. Affichez les deux séries de dalles cérébrales de manière anatomiquement symétrique (direction fronto-occipitale), en veillant à ce que leurs surfaces coronales soient visibles pour l’inspection oculaire directe et la photographie numérique (Figure 3a). Utilisez des surfaces de coupe avec des grilles millimétriques imprimées des deux côtés pour localiser les structures cérébrales, les tailles et les anomalies possibles de manière plus précise.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter d’éventuelles macro-anomalies et tenir compte d’éventuelles considérations clinico-neuroanatomiques et post-coupe. Demandez à un assistant de recherche de prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer toute la surface corticale. Prenez des notes (éventuellement à l’aide d’un enregistreur audio) de tout aspect inhabituel du cerveau par rapport à un cerveau normal.
- À l’aide d’un scalpel bien aiguisé, disséquez manuellement de petits blocs rectangulaires de tissu cérébral pour chaque région cérébrale établie. Suivre le schéma de prélèvement de la région cérébrale proposé décrit dans le tableau 1.
- Placez chaque bloc de tissu dans des histocassettes étiquetées séparément.
note: Chaque bloc de tissu cérébral doit être coupé pour s’adapter, autant que possible, au volume maximal standard de l’histocassette (30 x 20 x 4 mm3).
- Étiquetez les histocassettes à l’aide d’un code de dépersonnalisation pour chaque cas et à l’aide d’identificateurs neuroanatomiques spécifiques (n’utilisez pas de lettres ou de chiffres aléatoires pour différents cerveaux ; utilisez plutôt toujours les mêmes noms anatomiques régionaux ou les numéros correspondants, comme indiqué dans le tableau 1). Créez des codes anonymisés, par exemple, en générant des nombres aléatoires ou semi-aléatoires pour chaque cas (c'est-à-dire BRC 130, où 5B reste pour le cerveau, R reste pour la ressource, C reste pour le centre et 130 est une accession progressive ou AD160001, où AD signifie « étude de la maladie d'Alzheimer », 16 est l'année où l'autopsie a été pratiquée (2016), et 0001 un numéro de spécimen d’accession progressive).
note: Cette étape est très utile pour les futurs chercheurs. Conservez une légende et spécifiez l’hémisphère (L = hémisphère gauche, R = hémisphère droit). Utilisez deux couleurs différentes d’histocassettes, en établissant une couleur spécifique pour chaque hémisphère.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter d’éventuelles macroanomalies et tenir compte d’éventuelles considérations cliniques, neuroanatomiques et post-coupe. Demandez à un assistant de recherche de prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer toute la surface corticale. Prenez note de toute caractéristique inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal.
- Prenez des photos numériques (autant que nécessaire ou souhaité) de l’ensemble du cerveau coupé et des histocassettes associées.
Table 1. Schéma de coupe bihémisphérique. Ce tableau montre la zone anatomique unique à disséquer dans les hémisphères gauche et droit de chaque cerveau. La coupe symétrique bihémisphérique peut être effectuée sur des cerveaux frais et fixes.
| Région neuroanatomique | étiquette | Gauche fixe | Droite Fixe | Laissé gelé | La Reine des Neiges |
| Bulbe olfactif | Ob | | | | |
| Cortex frontal polaire | Pfc | | | | |
| Gyrus frontal moyen | Mfg | | | | |
| Gyrus orbito-frontal | OFG | | | | |
| Cortex pariétal lobulus inférieur | Le | | | | |
| Cortex temporal supérieur | Contre | | | | |
| Cortex temporal moyen | Mcc | | | | |
| Cortex cingulaire antérieur | Acc | | | | |
| Cortex cingulaire postérieur | Pcc | | | | |
| Gyrus pré-central (Mettre une épingle avant de couper) | PrCRG | | | | |
| Gyrus post-central (Mettre une épingle avant de couper) | PoCRG | | | | |
| Gyrus occipital (y compris les aires 17 et 18 de Broadmann) | Oc | | | | |
| amygdale | Amy | | | | |
| Ganglions de la base au niveau de la commissure antérieure avec le noyau basal de Meynert | BGMY | | | | |
| Thallamus et sous-thallamus | TH-STH | | | | |
| Corps mammaires et hypothalamus | MAM+HYPO | | | | |
| Noyaux basaux de Forbrane | Bf | | | | |
| Hippocampe antérieur | ah | | | | |
| Hippocampe postérieur (au niveau latéral du corps géniculé), y compris le cortex entorhinal et le cortex temporal inférieur | PH+CE+ITC | | | | |
| Cortex cérébelleux et noyau denté | CRBDe | | | | |
| Mésencéphale (y compris Substantia nigra) | MESSN | | | | |
| Pons dont Locus coeruleus (LC) | Pons | | | | |
| Medula oblongata Medula y compris DMV | MObi | | | | |
| Medula spinalis | MSpi | | | | |
| Tige de la moelle épinière | Sc | | | | |
| Dura Madre | décimètre | | | | |
