Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.
1. Sujets
- Utiliser des rats Sprague-Dawley mâles (250-300 g à l’arrivée).
- Abriter les rats dans des cages à fond solide dans une pièce de colonie avec une humidité de 40 à 60 % et une température ambiante (RT) de 21 ± 1 °C.
- Rendre l’eau et la nourriture disponibles à libitum.
- Gardez les rats sous un cycle d’obscurité/lumière inversé de 12:12 heures (lumières allumées à 20 heures).
2. Chirurgie
- Par rat, préparez deux morceaux de ligature intestinale chromique (5-0) d’environ 6 cm de long et placez-les dans une solution saline stérile pour éviter de les dessécher et de les rendre raides et cassants.
- Anesthésier l’animal avec du pentobarbital (60 mg/kg, intrapéritonéale [i.p.]) et traiter avec de l’atropine (0,1 mg/kg, i.p.). Surveillez le niveau d’anesthésie en étendant une jambe et en pinçant la toile de peau entre les orteils avec un ongle pour vous assurer qu’une pression adéquate est appliquée. Assurez-vous que l’animal ne fléchit pas son membre. Si nécessaire, administrez du pentobarbital supplémentaire.
- Rasez la tête du rat de manière à ce qu’une incision médiane du cuir chevelu puisse être faite d’environ 25 mm avec des distances égales avant et arrière du centre des yeux.
- Fixez la tête du rat dans un cadre stéréotaxique ou fixez la tête du rat. Placez le rat sur un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle.
- Appliquez une pommade ophtalmique sur les deux yeux pour éviter les dommages causés par le dessèchement.
- Frottez la zone de la tête rasée avec de l’alcool, puis de la bétadine.
- Faites une incision médiane du cuir chevelu, exposant le crâne et l’os nasal.
- Utilisez un microscope opératoire pour effectuer les étapes 2.9 à 2.16.
- Disséquez le bord de l’orbite libre, formé par les os maxillaire, frontal, lacrymal et zygomatique, à l’aide d’un coton-tige et d’une paire de pinces Dumont. Utilisez l’écouvillon pour absorber le sang d’un éventuel saignement.
- Pour donner accès au nerf infra-orbitaire (IoN), déviez doucement le contenu orbitaire avec un coton-tige de précision, en prenant soin de ne pas trop étirer le nerf ethmoïdal antérieur qui passe au-dessus de l’IoN. Disséquez l’IoN du tissu conjonctif environnant à l’aide d’un coton-tige de précision et d’une paire de pinces Dumont en utilisant un mouvement d’étalement. Utilisez l’écouvillon pour absorber le sang d’un éventuel saignement.
- Pour effectuer une ligature, poussez une extrémité d’un seul morceau de boyau chromique vers le bas le long de l’os frontal, médialement à l’IoN et avancez de quelques millimètres parallèlement et inférieure à l’IoN. La ligature est maintenant maintenue en place entre l’IoN et l’os frontal.
- Glissez la pointe d’une pince Dumont coudée à 45 degrés sous l’IoN pour la placer à proximité de la ligature. Rétractez doucement l’IoN latéralement pour révéler la ligature et la pointe de la pince. Saisissez la ligature avec la pince et retirez-la latéralement de sous l’IoN.
- Retirez la ligature de la cavité orbitale jusqu’à ce que les deux extrémités de la ligature soient plus ou moins équidistantes de l’IoN.
- Faites un « nœud coulant » à partir des deux extrémités de la ligature pour permettre un contrôle parfait du degré de constriction et faites glisser le nœud contre l’IoN. Faites glisser le nœud plus loin pour resserrer l’IoN de sorte que le diamètre du nerf soit réduit d’une quantité à peine perceptible. Faites un nœud normal sur le dessus du nœud coulissant afin que la quantité de constriction reste constante (c’est-à-dire ., pour empêcher le nœud fendu de glisser).
- Coupez les ligatures pour laisser environ 2 mm d’extrémités libres du nœud.
- Répétez la même procédure (étapes 2.11 à 2.15) pour effectuer une deuxième ligature à 2 mm d’intervalle de la première.
- Pour une chirurgie simulée, effectuez les étapes 2.2 à 2.10.
- Fermez l’incision du cuir chevelu à l’aide de sutures en polyester (4-0) et laissez le rat récupérer sur un tampon chauffant. Ne laissez pas l’animal sans surveillance jusqu’à ce qu’il ait repris une conscience suffisante pour maintenir sa position couchée sternale et ne retournez pas l’animal en compagnie d’autres animaux jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli.
- Pour éviter les effets analgésiques préventifs sur le développement de la douleur neuropathique, n’administrez pas d’analgésie pour la douleur post-chirurgicale.