Génération d’une lésion cérébrale traumatique légère à tête fermée dans un modèle murin

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation du dispositif expérimental et induction d’un traumatisme craniocérébral léger chez les rongeurs

NOTE : Transférer les rongeurs dans la zone d’attente 30 min à 1 h avant le début des expériences de traumatisme craniocérébral (TCC) pour s’acclimater. Choisissez une zone d’attente qui est peu affectée par le bruit de la procédure.

1. Préparez tout le matériel nécessaire à l’expérience et vérifiez que la configuration est correctement installée (par exemple , ajustez les paramètres en fonction de l’objectif de l’étude) (~5 – 10 minutes).
   REMARQUE : La gravité des blessures peut être ajustée en sélectionnant l’épaisseur de la membrane en polyester. D’après nos études, une épaisseur de membrane de 25,4 à 102 μm est utilisée pour les traumatismes crâniens légers à modérés chez la souris. Nous avons déjà utilisé des membranes d’une épaisseur de 76,2 à 127 μm pour produire des traumatismes crâniens légers à modérés chez les rats.
   1. Coupez soigneusement la membrane en polyester, insérez-la entre les sections entraînée et haut-parle, et fixez-la en serrant les boulons de connexion.
   2. Connectez le réservoir de gaz au tube d’amortisseur à l’aide de raccords à dégagement rapide. Assurez-vous que la membrane est bien fixée entre les sections d’entraînement et d’entraînement.
   3. Placez trois capteurs de pression à la sortie du tube de choc, à 120° de distance, pour surveiller les propriétés de l’onde de choc pendant l’induction du TCC.
   4. Assurez-vous que la distance par rapport à l’extrémité de l’appareil à tube de choc est correcte pour chaque sujet respectif à l’aide du micromètre installé. Maintenir constante la position de la tête du rongeur (c’est-à-dire , position, distance) constante dans les études pour permettre une évaluation cohérente des blessures.
      REMARQUE : Différents types de blessures peuvent être provoqués en sélectionnant la direction dans laquelle l’onde de choc frappe la tête. Pour la procédure visant à induire un traumatisme crânien léger à modéré décrit ici, le corps est placé perpendiculairement au tube de choc où l’onde de choc frappe le côté de la tête. Dans ce contexte, la tête est autorisée à se déplacer librement et est donc exposée à l’onde de choc et aux forces de rotation rapides permettant la génération d’effets de coup et de contre-coup.
   5. Lancez l’enregistrement à partir des capteurs de pression à l’aide de l’interface utilisateur graphique (GUI) du logiciel.

2. Anesthésie et positionnement des rongeurs dans l’installation

1. Transférer les rongeurs de la salle d’attente et induire l’anesthésie avec 4 % d’isoflurane dans l’oxygène et maintenir avec 2 % d’isoflurane dans l’oxygène pour réduire la détresse et la douleur.
   REMARQUE : Assurez-vous que l’animal ne répond pas au pincement des orteils ou de la queue avant de continuer. Assurez-vous que l’induction de l’anesthésie est cohérente pour tous les animaux de laboratoire, y compris les témoins fictifs. Cette procédure nécessite une anesthésie de faible intensité et de courte durée.
2. Placez le rongeur entièrement anesthésié dans le bouclier de tuyau en polychlorure de vinyle (PVC) avec rembourrage pour protéger les organes périphériques de l’onde de choc.
   REMARQUE : Les sujets témoins sont anesthésiés et placés à proximité de l’installation, mais ne sont pas directement soumis à l’onde de choc. Assurez-vous que les commandes sont soumises au bruit généré par le tube d’amortisseur.
3. Placez la tête du rongeur dans la zone de placement de la tête et soutenez-la par le bas, soit par un support intégré directement dans l’appareil de protection, soit par un tampon de gaze. Déterminez l’alignement de la tête en fonction de l’anatomie de chaque rongeur, avec le condyle occipital aligné avec le bord du bouclier protecteur.
   REMARQUE : Évitez de diriger l’onde de pression directement vers le tronc cérébral pour réduire la mortalité. Les lésions du centre respiratoire du tronc cérébral et de la moelle épinière cervicale sont connues pour contribuer à des anomalies respiratoires et même à la mort chez les rongeurs modèles de TCC.

3. Exposition des rongeurs à l’onde de choc

1. Ouvrir rapidement la vanne principale du réservoir de gaz comprimé pour produire un pic de pression qui rompt la membrane et produit une forte explosion qui confirme la génération d’une onde de pression. La membrane sera visuellement rompue lorsqu’elle sera retirée après l’expérience.
   REMARQUE : Une caméra à haute vitesse peut être utilisée pour capturer les effets de coup et de contre-coup de l’accélération de rotation subie par le rongeur pour une analyse plus approfondie.
2. Coupez le flux de gaz immédiatement après avoir entendu l’explosion.