Génération d’un modèle de rat de transposition du névrome tibial

Résumé

Source : Brakkee, E. M., et al. Chirurgie et tests comportementaux dans le modèle de transposition du névrome tibial chez le rat. J. Vis. Exp. (2023).

Cette vidéo montre une procédure permettant de générer un modèle de transposition de neurinome tibial (TNT) de rat. Après avoir exposé le nerf tibial dans la patte arrière d’un rat anesthésié, transectez le nerf. Ensuite, créez un tunnel sous-cutané, enfilez le nerf sectionné dans le tunnel et suturez-le en place. En l’absence d’une cible pour la réinnervation, des excroissances axonales désorganisées du nerf sectionné forment un névrome, qui déclenche une douleur neuropathique en excitant les nocicepteurs.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. Anesthésie et préparation

REMARQUE : Cette étude a été menée sur 15 rats Sprague Dawley mâles âgés de 12 semaines.

1. Anesthésier les animaux par induction avec 5 % d’isoflurane et maintenir l’anesthésie avec 2 %-3 % d’isoflurane.
   REMARQUE : L’entretien avec de l’isoflurane à 2 % entraîne généralement une anesthésie suffisante et une respiration spontanée, sans qu’il soit nécessaire de recourir à une intubation trachéale ou à une ventilation mécanique.
2. Vérifiez les réflexes des animaux en pinçant le pied avec une pince à épiler. Assurez-vous que l’animal ne réagit pas avant de continuer. Rasez le champ opératoire du genou à la cheville avec un rasoir électrique et appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour prévenir la sécheresse. Injecter 0,5 mg/kg d’analgésique carprofène par voie sous-cutanée dans la région abdominale.
3. Placez le rat anesthésié sur le dos, la tête à gauche ou à droite et la jambe à opérer près du chirurgien. Exorotatez le membre postérieur inférieur de manière à ce que la malléole médiale soit tournée vers le haut. Placez le rat sous un microscope stéréochirurgical avec un grossissement de 6x.
4. Désinfectez la zone rasée avec trois tours alternés de gommage à base d’iode suivis d’alcool. Placez une feuille stérile avec un trou opératoire sur la jambe, de sorte que seul le champ opératoire soit visible. Assurez-vous de maintenir ces conditions stériles pendant la chirurgie.

2. Chirurgie

1. Placez un petit coton-tige sous la cheville afin de maintenir le champ opératoire horizontal. Localisez le genou et faites doucement une incision longitudinale de 1 à 2 cm à l’aide d’un scalpel sur le côté médial de la patte arrière, du milieu du mollet à la cheville. Si nécessaire, ouvrez davantage la peau et l’hypoderme avec des micro-ciseaux jusqu’à ce que les couches musculaires soient visibles.
2. Identifiez le faisceau neurovasculaire superficiel comme étant composé de deux ou trois lignes blanches et d’une ligne violette/rouge plus épaisse, parfois avec des branches mineures, qui peuvent se déplacer librement sur les couches musculaires. À l’aide d’un électrocautérisation (voir la Table des matériaux), coagulez tout saignement actif ou suintement dans le champ opératoire. Attention à ne pas endommager le faisceau neurovasculaire.
3. Disséquer brusquement pour ouvrir le fascia entre les muscles gastrocnémiens, juste en arrière du faisceau neurovasculaire superficiel de 2,2. Entre le fascia des muscles, le nerf tibial se trouve. Le nerf tibial est environ trois fois plus grand que le nerf superficiel du faisceau neurovasculaire. Utilisez l’os tibial comme point de repère supplémentaire (le nerf tibial se trouve juste en arrière de l’os tibial).
4. Identifiez le nerf tibial et sa bifurcation.
   REMARQUE : La bifurcation est généralement visible avec une ligne plus claire longitudinalement sur le nerf.
5. Disséquez soigneusement le nerf tibial pour le libérer des faisceaux vasculaires environnants. Effectuez la dissection en déplaçant brusquement le nerf tibial et en coupant le tissu exposé qui montre un certain étirement tout en déplaçant le nerf tibial.
   REMARQUE : Si le nerf tibial est attaché à des veines croisées après dissection, ces veines peuvent être coagulées afin d’exposer l’ensemble du nerf tibial. Attention à ne pas coaguler le faisceau tibial lui-même.
6. Exposez le nerf tibial vers la proximale jusqu’à ce qu’il disparaisse sous une couche musculaire croisée. À ce stade, le nerf tibial semble plonger plus profondément dans la patte arrière vers le genou. Exposez le nerf tibial distalement jusqu’à la cheville.
   REMARQUE : Lorsque le nerf tibial est exposé plus distalement, la quantité de fibres de collagène croisées (c’est-à-dire les fibres perpendiculaires à la direction des fibres nerveuses) augmentera. Ces fibres de collagène doivent être coupées pour permettre une longueur suffisante pour la transposition du nerf tibial.
   1. Lorsque tout le nerf tibial est exposé, replacez les couches musculaires en arrière pour éviter la déshydratation du nerf. Si le nerf se déshydrate (c’est-à-dire qu’il devient plus raide, terne et ridé) et que la couverture avec des couches musculaires ne suffit pas, ajoutez des gouttes de solution saline pour l’hydrater.
7. À l’aide d’un outil de microchirurgie émoussé, de préférence un porte-micro-aiguille, disséquez la peau prétibiale de la couche musculaire sous-cutanée afin de créer un tunnel sous-cutané. Pour ce faire, tenez la peau vers le haut et poussez la pointe émoussée dans le tissu, parallèlement à la peau. Assurez-vous que l’extrémité du tunnel est située prétibialement ou plus latéralement pour assurer une accessibilité facile de la zone de test du névrome.
8. Augmentez l’isoflurane à 5 %. Retournez au nerf tibial et exposez-le (c’est-à-dire retournez à l’endroit décrit à l’étape 2.6). Coupez le nerf tibial (c’est-à-dire les deux branches plantaires) au niveau le plus distal près de la cheville. Diminuez l’isoflurane à la normale de 2 % à 3 %.
9. Modifiez le grossissement du microscope à 10x ou 16x. Identifiez l’épineurium du nerf tibial proximal à la coupe effectuée à l’étape 2.8, ou en cas de bifurcation plus proximale du nerf tibial, identifiez l’épineurium des branches plantaires médiale et latérale proximale à la coupe à l’étape 2.8.
   REMARQUE : L’épineurium est plus blanc et plus ferme par rapport aux fibres nerveuses à l’intérieur, qui sont plus jaunes et douces.
10. Placez soigneusement un 8-0 suture en nylon (voir le tableau des matériaux) à travers l’épineurium de l’extrémité du nerf proximal en tenant soigneusement l’épineurium avec une pince à épiler et en plaçant l’aiguille entre le nerf et l’épineurium avec une morsure d’environ 0,5 mm. Tirez la suture à travers et prenez une morsure avec l’aiguille sous-cutanée à l’extrémité du tunnel sous-cutané réalisé à l’étape 2.7. Faites un nœud, qui transposera le nerf latéralement dans le tunnel sous-cutané.
    REMARQUE : Si les deux branches plantaires partagent un épineurium commun, une suture devrait suffire. Si les deux branches plantaires ont leur propre épineurium, chaque épineurium doit être fixé individuellement. Évitez de placer la suture à travers la peau ; Fixez-le uniquement par voie sous-cutanée.
11. Placez une suture plus épaisse de couleur foncée (de préférence une suture 4-0 bleue ou noire) au ras de l’extrémité nerveuse fixée, sans pénétrer dans la peau. Assurez-vous que la suture est visible de l’extérieur de la peau. Vérifiez si le nerf reste en place après avoir bougé la patte et les muscles. Coupez les extrémités de la suture avec une extrémité de suture légèrement plus longue sur le 4-0 que sur le 8-0 suture.
12. Remettez le grossissement du microscope à 6x. Fermez la peau avec des sutures intraépidermiques à l’aide du 8-0 suturez et nettoyez doucement la peau avec 0,9 % de NaCl à l’aide d’un coton-tige.

3. Traitement post-chirurgical

1. Placez le rat dans une cage propre sous une serviette en papier dans une position confortable. Si la pièce est froide, placez un coussin chauffant sous une partie de la cage (uniquement sous une partie de la cage car l’animal doit pouvoir échapper à la chaleur en cas de besoin). Assurez-vous d’avoir un accès facile à la nourriture et à l’eau.
2. Ne laissez pas le rat post-chirurgical sans surveillance jusqu’à ce qu’il ait repris une conscience suffisante pour maintenir le décubitus sternal. Le rat peut être renvoyé en compagnie d’autres animaux lorsqu’il s’est complètement rétabli de l’anesthésie après la chirurgie. C’est généralement après 1 heure et lorsque le rat présente son schéma de marche et son comportement normaux.
3. 24 h et 48 h après la chirurgie, administrer une dose de 0,5 mg/kg de carprofène par voie sous-cutanée (région abdominale) pour traiter la douleur post-chirurgicale.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Carprofen	Local Veterinary Pharmacy	n/a	La pharmacie vétérinaire locale fabrique du caprofène dilution
Cotons-tiges	Nobamed	974255
Electrocautérerie	Fine Science Tools	18010-00
Ethanol 70 %	Interchema BV	400406
Ethilon 4.0	Johnson & Johnson	1854G	IMPORTANT : la couleur doit être bleue ou noire
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5
Isoflo, isoflurane Zoetis	Dechra Veterinary Products	B506
Cages inférieures en maille	StoeltingCo	57816 et 57824
Micro pinces	Fine Science Tools	11251-35
Micro porte-aiguilles	Fine Science Tools	12076-12
Micro ciseaux	Fine Science Tools	15019-10
Micro pince à épiler	Fine Science Tools	11254-20
NaCl 0.9 %	Trademed	H7 1000-FRE
Porte-aiguille	Fine Science Tools	12004-16
Pommade ophtalmique	Local Veterinary Pharmacie	n/a	La pharmacie vétérinaire locale fabrique la pommade
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
Scissors	Fine Science Tools	14001-12
Microscope chirurgical stéréo	Leica	A60 F	<
Evercare OneMed	1555-01
Lame chirurgicale nr.15	Fine Science Tools	10015-00
Pince à épiler	Fine Science Tools	11617-12

ophtalmiquetd style='border-top-style :none ;height :14.5pt ;'>Feuille stérile avec trou