Développement d’un modèle expérimental d’anévrisme chez un lapin à l’aide d’une poche vasculaire traitée à l’élastase

Résumé

Source : Wanderer, S., et al. Poche artérielle Modèle d’anévrisme de bifurcation microchirurgicale chez le lapin. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo montre la création d’un modèle expérimental d’anévrisme chez un lapin à l’aide d’une poche vasculaire traitée à l’élastase. Après l’excision d’un segment de l’ACC droit, le sac est traité avec de l’élastase, puis suturé à l’ACC gauche pour rétablir la circulation sanguine. Le stress qui en résulte sur les parois affaiblies de la poche induit la formation d’anévrisme.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

REMARQUE : Hébergez tous les animaux à une température ambiante de 22\u201224 degrés Celsius (°C) et maintenez un cycle lumière/obscurité de 12 heures (h). Fournir un accès gratuit à de l’eau, des granulés et un régime de foin à volonté à chaque fois. Des analyses statistiques ont été effectuées à l’aide du test non paramétrique de Wilcoxon-Mann-Whitney-U. Une valeur de probabilité (p) de ≤ 0,05 a été considérée comme significative.

1. Phase préchirurgicale

1. Effectuer un examen clinique préopératoire détaillé de tous les lapins devant être opérés immédiatement à proximité d’une salle d’opération calme et aseptique, en maintenant une température de 23 ± 3 °C.
   1. Enregistrer le poids de chaque animal macroscopiquement et évaluer les muqueuses, temps de remplissage capillaire et qualité du pouls.
   2. Plus loin, effectuez une auscultation cardiaque à l’aide d’un stéthoscope et une palpation abdominale.
   3. Sur la base des résultats cliniques, attribuez une classification de l’American Society of Anesthesiologists (ASA) à chaque lapin19. N’incluez que les animaux ayant un score ASA I dans l’étude.
   4. Rasez les deux oreilles externes avec un rasoir électrique et appliquez une crème à la prilocaïne-lidocaïne sur les artères auriculaires et les veines.
2. Sédatez le lapin avec une combinaison de 20 milligrammes (mg)/kilogramme (kg) de kétamine, 100 mg/kg de dexmédétomidine et 0,3 mg/kg de méthadone injectée par voie sous-cutanée (SC) à l’aide d’une seringue.
3. Laissez chaque animal tranquille pendant au moins 15 min.
4. Après cela, sous oxygénation supplémentaire de 3 litres (l) /minute (min) à l’aide d’un masque facial lâche et d’une surveillance constante à l’aide d’un oxymètre de pouls, placez une canule de 22 G dans l’artère centrale auriculaire gauche et une autre canule de 22 G dans la veine auriculaire de l’oreille controlatérale.
5. Rasez le champ opératoire (cou) et injectez 0,75 % de ropivacaïne péri-incisionnelle par voie intradermique. Ensuite, rasez-vous le front et préparez-vous à placer des capteurs électroencéphalographiques (EEG) pédiatriques.
6. Induire une anesthésie générale avec du propofol 1-2 mg/kg par voie intraveineuse (IV) pour faire effet. Ensuite, intubez immédiatement la trachée de tous les lapins à l’aide d’un tube en silicone (3 millimètres (mm) de diamètre interne) sous contrôle capnographique. Ensuite, transportez tous les lapins à la salle d’opération, placez-les en décubitus dorsal et connectez le tube à un système de cercle pédiatrique.
7. Réaliser l’approfondissement et le maintien de l’anesthésie grâce à l’isoflurane dans l’oxygène, en visant une concentration maximale d’isoflurane en fin d’expiration de 1,3 %.
8. Assurer un suivi clinique et instrumental (oxymétrie de pouls, doppler et pression artérielle invasive, électrocardiogramme à 3 dérivations, EEG, surveillance de la température rectale et gaz inhalés et expirés) jusqu’à l’extubation trachéale.
9. Pour maintenir l’hydratation, le lactate de Ringer est fourni à un débit continu (IRC) de 5 ml/kg/h par accès veineux. Confirmez toujours la bonne anesthésie à l’aide d’un pincement des orteils à un intervalle de 10 min.
10. Désinfectez le champ opératoire à l’aide de povidone iodée du manubrium sterni aux deux angles de la mâchoire. Maintenant, effectuez un drapage stérile du champ chirurgical.
11. Pendant la chirurgie, administrer l’analgésie avec de la lidocaïne à un IRC de 50 microgrammes (μg)/kg/min et du fentanyl à 3-10 μg/kg/h. Appliquez une ventilation spontanée ou assistée ainsi qu’une hypercapnie permissive. Effectuez une analyse des gaz du sang artériel au moins une fois pendant la chirurgie.
12. Traiter l’hypotension pertinente (pression artérielle moyenne < 60 mmHg) avec de la noradrénaline. Prévenez l’hypothermie (température rectale ≤ 38 °C) à l’aide d’un coussin chauffant ou d’un système de chauffage à air pulsé.

2. Phase chirurgicale – Étape I

1. Commencez l’opération par une incision cutanée médiane du manubrium sterni jusqu’au niveau des angles de la mâchoire/larynx. Disséquez nettement la peau et les tissus mous à l’aide d’un scalpel, de ciseaux chirurgicaux et d’une pince. Séparez l’hypoderme et le coussinet adipeux médialement par dissection émoussée.
2. Entrez dans la crête supérieure antérieure du muscle sterno-cléido-mastoïdien médialement sur le côté gauche par dissection contondante à l’aide de micro-pinces et de ciseaux chirurgicaux.
3. Macroscopiquement, effectuez une préparation contondante et séparez soigneusement l’ACC gauche du nerf vague distalement pour éviter la parésie laryngée en utilisant davantage de micro-pinces et de ciseaux chirurgicaux (Figure 1). Notez que la bifurcation de l’ACC gauche sert de repère peropératoire (Figure 2 et Figure 3A). Pour toutes les étapes suivantes, utilisez un écarteur de tissus mous pour améliorer la visualisation chirurgicale.
4. Après une préparation réussie et la libération de l’ACC distal gauche du nerf vagal, administrer localement de la papavérine (40 mg/ml, 1:1 diluée dans une solution de chlorure de sodium isotonique à 0,9 %). Protégez en permanence tous les segments vasculaires à l’aide de micro-écouvillons, suivis d’une administration externe de papavérine. Placez l’ACC gauche imbibé de papaverine sous le tissu musculaire autologue pour protéger le vaisseau du dessèchement à la lumière du microscope opératoire.
5. Changez de camp tout en maximisant le confort du chirurgien pendant l’intervention chirurgicale. Répétez la même intervention chirurgicale sur le côté droit. Disséquer le CCA distalement et proximal jusqu’aux repères prédéfinis (bifurcation carotidienne au niveau des angles de la mâchoire/larynx et de la veine jugulaire interne ; Figure 3A,B). Réinsérez un épandeur et administrez des micro-écouvillons et de la papavérine comme décrit précédemment.
6. Avant la ligature de l’ACC proximal droit, injecter de l’héparine (500 unités internationales (UI)/kg) par voie systémique via un cathéter auriculaire veineux.
7. Utilisez désormais un microscope chirurgical. Tout d’abord, ligaturez l’ACC proximal droit avec une suture non résorbable 4-0 directement à l’extrémité du repère proximal macroscopiquement visible pour éviter toute tension sur le vaisseau artériel.
   1. Deuxièmement, appliquez une ligature non résorbable 6-0 d’exactement 4 à 5 mm en sens distal à l’aide d’un clip vasculaire pour la mesure, en considérant qu’après avoir coupé distalement à partir de la première ligature 4-0, la poche artérielle résultante sera d’une longueur normalisée d’environ 3 à 4 mm chez chaque animal (Figure 4A,C).
8. Après avoir serré la ligature 6-0, clampez le CCA droit aussi distalement que possible avec un clip de vaisseau temporaire (comme normalement utilisé dans la chirurgie de l’anévrisme cérébral) pour éviter toute lésion endothéliale et pour créer un long segment de vaisseau pour l’irrigation afin d’éviter la thrombogenèse (Figure 4B).
9. Effectuez maintenant une coupe distale à la ligature non résorbable 4-0. Pour prélever la poche artérielle (Figure 4C), effectuez une deuxième coupe distale jusqu’à la ligature non résorbable 6-0.
10. Nettoyez méticuleusement la poche artérielle de tous les tissus mous et mesurez sa longueur, sa largeur et sa profondeur (Figure 4C) à l’aide d’une pince à vaisseaux. Si aucune autre modification n’est nécessaire, conserver le greffon artériel autologue dans une solution héparinée (500 UI/100 ml dans du chlorure de sodium isotonique à 0,9 %) à température ambiante jusqu’à ce qu’il soit utilisé à nouveau.

3. Dégradation de la poche artérielle

1. Si une dégradation de la poche artérielle est nécessaire, nettoyez-la méticuleusement des tissus mous et préincubez-la avec 100 UI d’élastase porcine dissoute dans 5 ml de Tris-buffer à température ambiante le jour de l’expérience pendant 20 min. N’utilisez pas de technique de pinceau. Incuber le sac artériel de manière intra- et extra-luminique à l’aide d’un agitateur.
2. Avant de mettre le sachet dans une solution héparinée de chlorure de sodium isotonique à 0,9 %, passez-le doucement trois fois pendant 3 minutes avec une pince anatomique dans une solution de chlorure de sodium isotonique à 0,9 % pour éliminer l’élastase porcine restante.
3. Si nécessaire, maintenez la lumière de la poche artérielle ouverte avec un microtube en silicone ; Protégez méticuleusement l’ACC gauche et droit pendant toute la procédure chirurgicale avec des micro-rembourrages humides.

4. Phase chirurgicale – Étape II

1. Pour une préparation plus poussée de l’ACC, placez deux micro-écouvillons ronds directement en dessous pour déplacer l’artère de manière plus superficielle. Maintenant, placez un micro-écouvillon avec un rembourrage violet sous l’ACC gauche au tiers distal pour une meilleure visualisation de l’artère.
2. Rincer l’ACC proximal droit avec une solution de chlorure de sodium isotonique à 0,9 % combinée à 500 UI d’héparine dissoute dans 100 ml de chlorure de sodium isotonique à 0,9 %. Afin de créer une anastomose sans tension, placez le CCA droit sous le coussinet adipeux/musculature péritrachéale en utilisant des ciseaux chirurgicaux pour le tunneliser vers le côté gauche. Retirez les tissus mous de l’artère.
   1. Effectuez maintenant une incision de 2 mm dans la bouche du poisson sur le côté proximal de l’ACC droit à l’aide d’un micro-ciseau et d’une pince.
3. Changez le côté sur la table d’opération. Clipsez l’ACC distal gauche avec un autre clip de vaisseau temporaire, suivi de l’ACC proximal gauche avec deux clips de vaisseau temporaires. Protégez tous les segments vasculaires exposés du dessèchement sous la lumière chirurgicale à l’aide de micro-écouvillons humides.
4. Libérer complètement le tiers distal de l’ACC gauche des tissus mous et effectuer une artériotomie. Utilisez des micropinces chirurgicales et saisissez doucement des tissus mous. Maintenant, élevez l’artère et incisez lentement l’ACC distal gauche avec un microciseau chirurgical. Rincer les segments des vaisseaux avec de l’héparine (500 UI dissoutes dans 100 ml de solution de chlorure de sodium isotonique à 0,9 %).
5. Après avoir effectué l’artériotomie avec des micro-pinces incurvées et des micro-ciseaux, élargissez l’artériotomie située au tiers distal de l’ACC gauche, en mesurant environ 2 fois le diamètre de l’émoussé droit de l’artère carotide et du greffon autologue. Cela permet une circulation sanguine suffisante dans la poche artérielle.
6. Retirer la poche artérielle de la solution saline héparinisée. Placez le sac dans le champ opératoire, où la bifurcation est prévue. Commencez à suturer l’arrière de la carotide droite émoussée à l’aide d’une suture 9-0 non résorbable, suivie d’une suture à l’arrière située sur le crâne au niveau de l’incision de la bouche du poisson. Terminez de coudre l’arrière de distal à proximal par des points simples.
7. Pendant la suture, gardez toutes les poches préincubées d’élastase humides avec une irrigation continue. Tout en suturant la paroi vasculaire de la poche, utilisez des micro-pinces chirurgicales incurvées pour ouvrir doucement la lumière avec son extrémité. Chaque fois que vous suturez des parties de l’ACC gauche ou proximal droit, utilisez des micro-pinces chirurgicales droites. Ensuite, suturez la face arrière horizontale.
8. Suturez ensuite la face avant horizontale, en commençant par le dôme de l’anévrisme en se déplaçant vers sa base. Ensuite, commencez par des points simples distalement sur le côté avant en vous déplaçant vers la queue.
   1. Pour toutes les étapes 4.5\u20124.8 lors de la suture de l’anastomose, faites attention à saisir la partie du vaisseau proche de l’artériostomie pour éviter la sténose iatrogène. De plus, humidifiez en continu tous les segments vasculaires pendant toute la durée de l’intervention chirurgicale de manière extraluminique avec une seringue remplie d’une solution de chlorure de sodium héparinée (500 UI dissoutes dans 100 ml de chlorure de sodium isotonique à 0,9 %) et protégez-les avec des micro-écouvillons humides.
   2. Avant de terminer l’anastomose, irriguez l’ensemble du complexe avec une solution de chlorure de sodium isotonique héparinée à 0,9 % par voie intraluminale (500 UI dissoutes dans 100 ml de chlorure de sodium isotonique à 0,9 %). Attention, les poches artérielles modifiées à l’élastase doivent être cousues le plus rapidement possible en raison de leur forte tendance à se dessécher et à thrombose. En raison du comportement agressif de la concentration résiduelle d’élastase dans la poche concernant la digestion des vaisseaux circonférentiels, procédez rapidement à la chirurgie pour re-perfuser rapidement le complexe vasculaire.
9. Retirez toutes les pinces vasculaires temporaires par étapes.
   1. Retirez la pince distale de l’ACC gauche. Acceptez les saignements mineurs et arrêtez-les en imprimant doucement des micro-écouvillons sur l’anastomose. Ensuite, retirez la pince du CCA droit, appuyez doucement avec un micro-écouvillon et une pince pour éviter la formation de thrombus.
   2. Si nécessaire, remplacez les clips vasculaires temporaires pour assurer une coagulation suffisante. Ensuite, relâchez les deux clips vasculaires du côté gauche vers la proximale. Si nécessaire à n’importe quelle étape, remplacez les clips pour permettre la coagulation ou pour effectuer une recouture.
10. À ce stade, effectuez une angiographie par fluorescence du complexe vasculaire (Figure 5)
    REMARQUE : L’angiographie par fluorescence est réalisée en administrant 1 ml de fluorescéine IV, à l’aide de 2 filtres passe-bande, d’un smartphone avec caméra vidéo et d’un projecteur de vélo. Cette procédure a déjà été décrite ailleurs20,21,22.
11. Enfin, fermez le situs opératoire. Réadaptez et suturez doucement le coussinet adipeux avec une suture résorbable 3-0 à nœuds uniques pour protéger l’anastomose. Fermez l’hypoderme et la peau de la même manière.

5. Phase postopératoire

1. Arrêter l’administration d’isoflurane et d’analgésie systémique à la fin de l’intervention et procéder à l’extubation trachéale dès que le réflexe de déglutition est revenu.
2. Administrer 0,5 mg/kg de méloxicam IV, 10 mg/kg d’aspirine (ASS) IV, 100 μg de vitamine B12 SC et 20 mg/kg de clamoxyl IV.
3. Fournir une oxygénation supplémentaire et un réchauffement actif jusqu’à ce que les lapins aient spontanément retrouvé leur décubitus sternal.
4. Effectuer le suivi postopératoire et les soins aux animaux quatre fois par jour pendant les trois premiers jours conformément aux directives pour l’évaluation et la gestion de la douleur chez les rongeurs et les lapins23,24.
5. Administrer une analgésie postopératoire au moyen d’un timbre de fentanyl (12 μg/h) appliqué sur l’oreille externe, de méloxicam une fois par jour pendant trois jours et de méthadone comme traitement de secours SC, selon la feuille de pointage pour l’évaluation de la douleur. Administrer 250 UI/kg d’héparine de faible poids moléculaire (LMH) par voie sous-cutanée pendant trois jours chez tous les lapins.

Résultats

Figure 1 : Étape initiale du fonctionnement.

Étape opératoire initiale, représentant l’artère carotide gauche (flèche blanche), le nerf vagal (flèche noire) (A) et la séparation minutieuse de l’artère carotide gauche du nerf vagal distalement pour éviter la parésie...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
3-0 suture résorbable	Ethicon Inc., USA	VCP428G
4-0 suture non résorbable	B. Braun, Allemagne	G0762563 <
B. Braun, Allemagne	C0766070
9-0 suture non résorbable	B. Braun, Allemagne	G1111140
Adrenaline	Amino AG	1445419	any generic
Amiodarone	Helvepharm AG	5078567	tout générique
Appareil d’anesthésie	Dräger		tout autre
Aspirin	Sanofi-Aventis (Suisse) SA	622693	tout générique
Atropine	Labatec Pharma SA	6577083	tout générique
Filtre passe-bande bleu	Thorlabs	FD1B	tout autre
Filtre passe-bande vert	Thorlabs	FGV9	tout autre
Pince			tout autre
Projecteur			tout autre
Clip pour récipient Biemer (2 x)	B. Braun Medical AG, Aesculap, Suisse	FD560R	temporaire
Indice bispectral (néonatal)			tout autre
Brassard de tensiomètre (néonatal)			tout autre
Clamoxyl	GlaxoSmithKline AG	758808	tout générique
Dexmédétomidine	Ever Pharma	136740-1	n’importe quel générique
Électrodes d’électrocardiogramme			tout autre
Elastase	Sigma Aldrich	45125 n’importe	quel générique
Ephedrine	Amino AG	1435734 n’importe	quel générique
Esmolol	OrPha Swiss GmbH	3284044	tout générique
Fentanyl (utilisation intraveineuse)	Janssen-Cilag AG	98683	tout générique
Fentanyl (transdermique)	Mepha Pharma AG	4008286	tout générique
Fluoresceine	Curatis AG	5030376	tout générique
Fragmin	Pfizer PFE Switzerland GmbH	1906725	tout générique
Glyco			any generic
Coussin chauffant			tout autre
Solution isotonique de chlorure de sodium (0.9 %)	Fresenius KABI	336769	tout générique
Kétamine	Pfizer	342261	tout générique
Shaker de laboratoire	Stuart	SRT6	tout autre
Lidocaïne	Streuli Pharma AG	747466	tout générique
Longuettes			any other
Metacam	Boehringer Ingelheim	P7626406	any generic
Methadone	Streuli Pharma AG	1084546	any generic
Microtubes			tout autre
Porte-micro-aiguille			tout autre
Midazolam	Accord Healthcare AG	7752484	tout générique
Porte-aiguille			tout autre
O2-Masque			facial tout autre
Opération microscope	Wild Heerbrugg		tout autre
Papaverine	Bichsel		tout générique
Prilocaine-lidocaine crème	Emla		tout générique
Propofol	B. Braun Medical AG, Suisse		tout générique
Oxymètre			n’importe quel générique
Sonde de température rectale (néonatale)			tout autre
Ropivacaine	Aspen Pharma Schweiz GmbH	1882249	tout générique
Scalpell	Swann-Morton	210	tout autre
Rasoir			tout autre
Smartphone			tout autre
Pince à tissus mous			tout autre
Épandeur			tout autre
Bols éponges			tout autre
Microécouvillons stériles			tout autre
Stéthoscope			tout autre
Micro-pinces droites			tout autre
Micro-ciseaux			tout autre
Pinces droites			tout autre
Champ chirurgical			tout autre
Ciseaux			tout autre
Seringues 1 ml, 2ml et 5 ml			tout autre
Tris-Buffer	Sigma Aldrich	93302	tout générique
Applicateur de clip vasculaire	B. Braun, Allemagne	FT495T
Cathéter veineux et artériel 22 G			any generic
Vitarubin	Streuli Pharma AG	6847559	any generic
Yasargil titan standard clip (2 x)	B. Braun Medical AG, Aesculap, Suisse	FT242T	temporaire

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