Quantification des somas de cellules ganglionnaires rétiniennes après une hypertension oculaire induite par la cautérisation

Résumé

Source : Lani-Louzada, R., et al. Cautérisation du plexus vasculaire limbique pour le glaucome induit chirurgicalement chez les rongeurs. J. Vis. Exp. (2022).

Cette vidéo démontre la quantification des cellules ganglionnaires rétiniennes à partir de rétines de rat fixées chimiquement et soumises à une cautérisation complète du plexus vasculaire limbique. Le processus comprend la perméabilisation, la coloration des anticorps et la contre-coloration nucléaire, suivie d’une visualisation au microscope à épifluorescence pour évaluer l’impact d’une pression intraoculaire élevée sur la viabilité des cellules ganglionnaires rétiniennes.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Quantification des somas de cellules ganglionnaires rétiniennes

REMARQUE : La procédure suivante est pour la quantification des somas RGC, basée sur la coloration immunohistochimique des supports plats rétiniens avec un anticorps contre la protéine 3A du domaine homéobox/POU spécifique au cervea....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DAKO	Dako North America	S3023	Antifade mounting medium
LSM 510 Meta	Carl Zeiss	-	Epifluorescence confocale microscope
souris IgG1 monoclonale anti-Brn3a	MilliporeSigma	MAB-1585	Brn3a solution
TO-PRO-3	Thermo Fisher Scientific	T3605	Contrecoloration nucléaire fluorescente rouge lointaine ; émission à 661 nm
Triton X-100	Sigma-Aldrich	9036-19-5	Surfactant non ionique
IgG donkey anti-mouse anticorps + Alexa Fluor 555	Thermo Fisher Scientific	A31570	Secondary antibody solution
DAPI	Thermo Fisher Scientific	28718-90-3	diamidino-2-phenylindole ; contre-coloration nucléaire fluorescente bleue ; émission à 452±3 nm

d’anticorps primaires