Évaluation des niveaux de neurotransmetteurs excitateurs chez les rats induits par l’épilepsie chronique

Résumé

Source : Soukupová, M., et al. Microdialyse des acides aminés excitateurs lors d’enregistrements EEG chez des rats se déplaçant librement. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo montre l’évaluation des niveaux de neurotransmetteurs excitateurs extracellulaires chez des rats atteints d’épilepsie chronique. Après l’implantation d’une sonde de microdialyse dans le cerveau et la confirmation de l’absence de convulsions à l’aide de l’électroencéphalographie (EEG), du liquide extracellulaire est prélevé pour évaluer les niveaux élevés de neurotransmetteurs chez les rats épileptiques. Une solution à haute teneur en potassium est ensuite infusée pour maintenir l’excitabilité neuronale et déclencher une libération accrue de neurotransmetteurs, avec des échantillons collectés pour évaluer le pic induit par le potassium dans les neurotransmetteurs excitateurs.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

Ce protocole est spécifiquement adapté pour la détermination du glutamate et de l’aspartate dans les dialysats cérébraux de rat obtenus sous contrôle EEG de séances de microdialyse chez des rats épileptiques et non épileptiques. Bon nombre des matériaux décrits ici peuvent être facilement remplacés par ceux que l’on utilise dans son laboratoire pour les enregistrements EEG ou la microdialyse.

1. Assemblage du dispositif de sonde-électrode de microdialyse

1. Utilisez une électrode à....

Résultats

Figure 1. Préparation étape par étape du dispositif à implanter.(A) Électrode à 3 canaux avec électrode de mise à la terre de 10 cm de long dans son manchon de protection à gauche et canule de guidage pour la microdialyse à droite nécessaire.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Électrode à deux torsades à 3 canaux	Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA	MS333/3-B/SPC	Material
canule guide	Agn Tho’s, Lindigö, Suède	MAB 4.15.IC	Material
Résine KK2 Plastik	Elettra Sport, Lecco, Italie	KK2	Material
Super Attack gel Loctite	Henkel Italia Srl, Milan, Italie	2047420_71941	Material
Imalgene-Kétamine	Merial, Toulouse, France	221300288 (AIC)	Solution
Xylazine	Sigma, Milan, Italie	X1251	Matériel
Isoflurane-Vet	Merial, Toulouse, France	103120022 (AIC)	Solution
Altadol 50 mg/ ml - tramadol	Formevet, Milan, Italie	103703017 (AIC)	Solution
Gentalyn 0.1 % crm - gentamycine	MSD Italia, Roma, Italie	20891077 (AIC)	Material
ciment dentaire rapide simplex	Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, Royaume-Uni	ACR811	Material
GlasIonomer CX-Plus Cement	Shofu, Kyoto, Japon	PN1167	Material
porte-clip de sonde	Agn Tho’s, Lindigö, Suède	p/n 100 5001	Equipment
Histoacryl® Blue Topical Skin Adhesive	TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA	TS1050044FP	Material
Valium 10 mg/2 ml - diazépam	Roche, Monza, Italie	019995063 (AIC)	Material
Seringue de 1 ml avec aiguille 25G	Vetrotecnica, Padoue, Italie	3	Material
rat aiguille d’alimentation flexible 17G	Agn Tho’s, Lindigö Suède	7206	Material
Appareil Grass Technology	Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, Californie, USA	M665G08	Équipement (amplificateur AS40, boîtier de tête, câbles d’interconnexion, téléfacteur modèle RPSA S40)
système modulaire d’acquisition et d’analyse de données MP150	Biopac, Goleta, Californie, États-Unis	MP150WSW	Equipment
système de vidéosurveillance numérique	AverMedia Technologies, Fremont, Californie, États-Unis	V4.7.0041FD	Equipment
sonde de microdialyse	Agn Tho’s, Lindigö	Suède MAB 4.15.1.Cu	Material
sonde de microdialyse	Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA	S-8010	Material
chauffe-moteur	Grant Instruments, Cambridge, Angleterre	QBD2	Equipment
stirrer	Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italie	711	Equipment
pompe à perfusion	Univentor, Zejtun, Malta	864	Equipment
tube en polyéthylène à alésage fin	Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, États-Unis	800/100/100/100	Material
adaptateurs de tubes bleus	Agn Tho’s, Lindigö Sweden	1002	Material
adaptateurs de tubes rouges	Agn Tho’s, Lindigö Sweden	1003	Material
Seringue de 2,5 mL avec aiguille 22G	Chemil, Padoue, Italie	S02G22	Material
bouchon de flacon	Cronus, Labicom, Olomouc, République tchèque	VCA-1004TB-100	Material
septum	Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, États-Unis	National C4013-60 8 mm TEF/SIL	septum Material
insert en verre avec ressort inférieur	Supelco, Sigma, Milan, Italie	27400-U	Material
flacon d’échantillonneur automatique	National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italie	C4013-2	Material
Contrôleur de système Smartline manager 5000 et unité de dégazage	Knauer, Berlin, Allemagne	V7602	Equipment
Pompe à gradient quaternaire Smartline 1000	Knauer, Berlin, Allemagne	V7603	Equipment
Composition de la solution de Ringer	en mM : MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3 % BSA		Solution
modified Composition de la solution de Ringer	en mM : MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3 % BSA		Solution
salin	0.9 % NaCl, ph ajusté à 7.0		Solution
saccharose Solution	10 % de saccharose dans de l’eau		Solution

distillée