Réalisation d’une axotomie par écrasement du nerf facial dans un modèle de souris

Résumé

Source : Olmstead, D. N., et al., Axotomie du nerf facial chez la souris : un modèle pour étudier la réponse des motoneurones aux blessures. J. Vis. Exp. (2015).

Cette vidéo montre la procédure d’écrasement du nerf facial chez une souris, où la dissection contondante à travers des points de repère clés expose le tronc du nerf facial au niveau du foramen stylomastoïdien. Les forceps sont ensuite utilisés pour comprimer le tronc nerveux, induisant des lésions axonales et perturbant la transmission du signal neuronal.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. Approche chirurgicale

1. Alignez et focalisez le stéréoscope avec le champ chirurgical. Ajustez le cône de nez et fixez-le avec du ruban adhésif de manière à ce qu’il soit positionné le long du bord du champ visuel.
2. Avec la souris allongée sur son côté gauche, collez le bord de l’oreille droite au cône du nez, exposant la zone derrière l’oreille où l’incision sera faite. Assurez-vous que la veine auriculaire postérieure se déplace horizontalement à travers l’oreille. Notez que le bon placement de l’animal et le bandage de l’oreille sont cruciaux afin de trouver rapidement le nerf facial.
3. Mouillez la fourrure sur et derrière l’oreille avec de l’éthanol à 70 % et rasez le site chirurgical à l’aide d’un rasoir ou d’une lame de scalpel. Le pré-mouillage de la fourrure facilite le rasage dans cet endroit anatomique.
4. Nettoyez la peau avec une solution iodée, telle que le gommage chirurgical à la bétadine (7,5 % de povidone iode), suivi de 70 % d’éthanol. Répétez ce nettoyage deux fois de plus pour désinfecter soigneusement la zone.
5. Pour déterminer où faire l’incision, tracez la veine auriculaire postérieure de l’oreille caudalement jusqu’à la zone postérieure à la protubérance de l’oreille. À l’aide de ciseaux à ressort, faites une incision de 4 mm à 2 à 3 mm en arrière de la protubérance.
6. Disséquez la graisse sous-cutanée et le fascia à l’aide d’une dissection émoussée. Évitez de couper directement avec les ciseaux, car les vaisseaux sanguins ou les tissus musculaires pourraient être facilement endommagés.
7. En cas de saignement, appliquez une pression sur le site chirurgical à l’aide d’un coton-tige stérile pendant au moins 30 secondes. En cas de perte importante de liquide, injecter par voie intrapéritonéale à la souris jusqu’à 0,5 ml de solution saline stérile à 0,9 % à l’aide d’une aiguille de 25 ou 27 g.
8. Utilisez plusieurs points de repère clés, le nerf accessoire de la colonne vertébrale, le conduit auditif et le muscle digastrique antérieur (décrit ci-dessous), pour localiser le nerf facial. Disséquez autour de ces points de repère jusqu’à ce que les branches du nerf facial soient visualisées. Le nerf apparaîtra comme une structure blanche solide significative lorsqu’il sera révélé, et une couche de fascia l’adhère aux structures sous-jacentes.
   1. Trouvez le nerf accessoire de la colonne vertébrale, qui part de la partie caudale du crâne pour innerver le muscle trapèze une fois que la graisse sous-cutanée et le fascia ont été disséqués. Le nerf facial est profond par rapport au nerf accessoire de la colonne vertébrale.
   2. Trouvez le conduit auditif cartilagineux qui semble blanc nacré et peut être vu rostralement au nerf facial.
   3. Trouvez le ventre musculaire du muscle digastrique antérieur qui se trouve au-dessus et caudal du nerf facial.
9. Lorsque les principales branches du nerf facial sont visualisées, tracez-les dorsalement pour trouver leur origine à partir du foramen stylomastoïdien. À l’aide d’une pince Dumont à pointe fine #5/45 pour maintenir le site chirurgical ouvert, avancez les pointes des ciseaux à ressort en suivant le trajet du nerf, puis déplacez la pince dorsalement pour maintenir ouverte la zone nouvellement avancée.
10. Visualisez le tronc du nerf facial avec les branches zygomatique, buccale et mandibulaire marginale à ce stade.
    NOTE : La branche temporelle se trouvera plus près du foramen. Le nerf mandibulaire marginal se ramifie dans ses parties supérieure et inférieure plus proches de la mâchoire, donc ces branches nerveuses ne seront pas visibles à ce niveau.
    1. Si vous effectuez une blessure par écrasement, utilisez la pince Dumont #5/45 pour comprimer le nerf pendant 30 secondes en utilisant une pression constante pour sectionner tous les axones, puis répétez cet écrasement à un deuxième angle perpendiculaire au premier site d’écrasement. Évitez d’appliquer des quantités variables de pression pendant l’écrasement de 30 secondes, sinon les blessures seront incohérentes entre les animaux.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Stereo Microscope	Leica	M60
Ruban d’étiquetage	Fisher Scientific	15-952	<
Fine Science Tools	15003-08	Stériliser avant utilisation
Dumont #5/45 Forceps - Standard pointes/Incliné 45°/Dumoxel/11cm	Outils de Fine Science	11251-35	Stériliser avant utilisation
0.9 % Chlorure de sodium injectable, USP	Hospira	0409-4888-10
Bétadine, 16 oz, avec distributeur<	19-027132
70 % Ethanol
Stérilisateur de billes de verre

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