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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Placement des clips d’anévrisme
- Placez un clip d’anévrisme de rat 30 G sur chaque artère utérine. Assurer l’arrêt du flux sanguin, y compris les pouls proximaux et distaux, et l’assombrissement des vaisseaux utérins, y compris les placentas individuels. Couvrez les cornes exposées et tout le champ opératoire avec de la gaze et irriguez avec une solution saline stérile. Irriguez le champ environ toutes les 10 minutes pour le garder humide.
- Après 60 min, retirez la gaze et irriguez le champ. Assurez-vous que les cornes et les vaisseaux utérins sont suffisamment humidifiés pour un retrait réussi du clip. Retirez délicatement chaque clip d’anévrisme à l’aide d’une pince. Veillez à ne pas causer de traumatisme au vaisseau et à maintenir l’intégrité des tissus pendant le retrait.
- Irriguez soigneusement les cornes utérines et le champ, en prenant soin d’enlever tous les fils de gaze égarés des sacs amniotiques.
2. Injection de lipopolysaccharide dans les sacs amniotiques
- À la base de chaque sac amniotique, juste en avant de la plaque placentaire, injectez 100 μl de lipopolysaccharide (LPS) (4 μg/sac) avec le colorant bleu d’Evan dilué dans le liquide amniotique. Utilisez une pince émoussée pour stabiliser et faire pivoter chaque sac amniotique dans une position optimale pour l’injection. Le colorant bleu d’Evan dilué est un agent de contraste qui est utile pour confirmer le bon placement de la seringue et l’injection.
REMARQUE : Utilisez uniquement une seringue à insuline ultra-fine de 0,3 ml avec une aiguille de 8 mm 31 G attachée pour les injections intra-amniotiques. L’utilisation d’aiguilles de plus gros calibre entraînera une perte chronique de liquide amniotique, la mort fœtale et la réabsorption de la grossesse. De petites quantités de fuite de liquide amniotique lors du retrait de la seringue peuvent être atténuées par une pression directe sur le sac amniotique. Certains fœtus de rat peuvent tolérer un certain degré d’oligohydramnios. Cependant, la perte aiguë de liquide amniotique à la suite d’une ponction avec des aiguilles de gros calibre ou d’une ponction accidentelle entraînant une fuite chronique de liquide entraîne une perte fœtale et, dans les cas graves, la perte des grossesses voisines. - Irriguez les cornes utérines 3 fois avec une solution saline stérile.
3. Fermeture de la laparotomie
- À l’aide d’une pince, ramenez soigneusement les cornes utérines dans la cavité péritonéale. En assurant un espace adéquat entre les sacs amniotiques et l’incision médiane, rapprochez à nouveau les bords de la couche musculofasciale à l’aide d’une suture en soie 3-0. Soyez conscient de l’emplacement des sacs amniotiques tout en fermant l’incision musculaire. Veillez à ne pas suturer dans ou à travers un sac.
- Rapprochez la couche de peau, à l’aide d’une suture en soie 3-0, en fermant la couche de peau.
REMARQUE : La laparotomie doit être fermée en deux couches de sutures continues pour permettre l’expansion cutanée et musculaire avec l’augmentation de la gestation. Les sutures continues permettent une tension uniformément répartie de la plaie. Les sutures interrompues sont moins souhaitées car les nœuds multiples sont irritants et peuvent être facilement mâchés par le rat lorsqu’il se remet de l’anesthésie. Les agrafes chirurgicales ne sont pas souhaitées. La queue des nœuds chirurgicaux doit être très courte (<3 mm). - Injecter 1 ml de bupivacaïne à 0,125 % par voie sous-cutanée sur les bords de la plaie à l’aide d’une aiguille de 26 g. Administrer une dose de 0,1 mg/kg de buprénorphine par voie sous-cutanée au niveau de la nuque.
- Éteignez l’isoflurane et séchez le rat avec une serviette si nécessaire. Placez le rat dans une cage domestique propre et surveillez sa récupération de l’anesthésie. Assurez-vous que le rat ne devient pas hypothermique.