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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Assemblage des lunettes pour souris
- Préparez les pièces nécessaires à l’assemblage des lunettes (Figure 1a). Pour chaque souris, préparez tous les éléments suivants : un bâton en nylon monté sur la tête, un cadre supérieur et un cadre inférieur en titane, deux lentilles avec des puissances appropriées en fonction du but de l’expérience, une vis de taille M1.4 d’une longueur de 10 mm, un écrou pour une vis de taille M1.4, une rondelle plate pour une vis de taille M1.4 d’une épaisseur de 0,3 mm, et deux pointes d’ongles artificielles. REMARQUE : Deux types de cadres existent avec des hauteurs différentes. Pour une souris, un cadre supérieur et un cadre inférieur sont utilisés comme ensemble. Les cadres supérieurs doivent être placés au-dessus des cadres inférieurs afin de rendre les champs de vision symétriques. Les montures et les verres sont spécialement conçus et fabriqués par le groupe de recherche des auteurs. Ceux-ci sont disponibles en contactant les auteurs correspondants de cet article. D’autres pièces peuvent être trouvées dans les magasins d’outillage de détail.
- Assemblez le cadre pour l’œil droit et l’œil gauche séparément.
- Disposez le bout de l’ongle vers l’extérieur pour obtenir le meilleur effet protecteur. Ajustez l’angle entre le bout de l’ongle et le cadre pour qu’il soit d’environ 130° afin d’éviter de masquer le champ de vision de la souris (Figure 1b). Collez les pointes des ongles artificiels sur le cadre à l’aide d’un adhésif cyanoacrylate.
REMARQUE : Le bout des ongles peut aider à protéger l’objectif contre les rayures de la souris. La direction des pointes des ongles doit être opposée car le cadre supérieur et le cadre inférieur sont utilisés pour l’œil droit et l’œil gauche, respectivement. - Attendez au moins 12 h pour laisser sécher complètement l’adhésif, puis utilisez un coupe-ongles pour ajuster la forme du bout des ongles à environ 1 cm × 1 cm en coupant et en coupant.
- Collez la lentille sur la monture à l’aide d’un adhésif cyanoacrylate. Placez l’objectif sur le cadre à la main et tenez le cadre horizontalement. Injectez l’adhésif cyanoacrylate à partir du bord de la lentille et laissez l’adhésif se répandre par tension superficielle.
REMARQUE : L’adhésif érodera l’objectif et influencera sa transparence, alors assurez-vous que l’adhésif ne touche que la partie périphérique de l’objectif. Utilisez une lentille plane à 0 dioptrie (D) comme lentille de contrôle et une lentille négative pour induire la myopie. L’effet des différentes puissances des lentilles négatives (–10 D à –50 D) a été décrit ailleurs4. Pour maximiser l’induction de la myopie, une lentille -30 D est recommandée pour induire la myopie. Le FDM peut également être induit avec le même appareil simplement en changeant la lentille dans le capuchon du microtube de 1,5 mL comme diffuseur.
- Serrez la vis dans le bâton en nylon avec la rondelle du côté plat du bâton. Préparez respectivement les lunettes et les bâtons avant l’expérience et stockez-les pour une utilisation ultérieure (Figure 1c).
REMARQUE : Le protocole peut être mis en pause ici.
2. Fixation du cadre sur le crâne de la souris.
- Appliquez une goutte de collyre à base d’hyaluronate de sodium purifié à 0,1 % pour prévenir la sécheresse sur chaque œil.
REMARQUE : Les gouttes oculaires à la surface de l’œil influenceront les valeurs de réfraction et les mesures de longueur axiale. N’utilisez pas le collyre après l’anesthésie tant que toutes les mesures ne sont pas terminées. - Placez le menton de la souris anesthésiée sur une pente faite d’argile ou de tout ce qui peut être utilisé comme oreiller pour que le plan avant du crâne soit horizontal.
- Stérilisez les cheveux et le cuir chevelu entre les oreilles et les yeux à l’aide d’un coton-tige contenant 70 % d’éthanol.
- Coupez la peau entre les oreilles et les yeux pour exposer le crâne pendant environ 0,8 sq.cm à l’aide de ciseaux chirurgicaux et d’une pince à épiler. Utilisez un liquide de gravure dentaire et un coton-tige pour enlever le périoste. Stérilisez les ciseaux chirurgicaux et la pince à épiler avec de l’éthanol à 70 % avant l’opération de chaque souris.
NOTE : Il peut être nécessaire de couper les cheveux et de porter des gants stériles. Vérifiez les dispositions de la commission de protection des animaux compétente avant cette procédure. Dans la plupart des cas, le liquide de mordançage dentaire est l’un des accessoires du système d’adhésif dentaire autopolymérisable. Si le liquide de gravure dentaire n’est pas disponible, utilisez plutôt de l’éthanol à 70 %. - Assemblez un ensemble de cadres sans lentille pour aider à fixer le bâton dans la bonne position. Placez les cadres sur la tête de la souris. Ajustez soigneusement la position des montures pour vous assurer que les deux yeux sont au milieu du cadre vide.
- Utilisez un système d’adhésif dentaire autopolymérisable pour fixer le bâtonnet sur la tête de la souris. Attention à ne pas laisser le liquide du système d’adhérence s’écouler dans l’œil de la souris.
REMARQUE : La méthode d’utilisation du système d’adhésif dentaire autopolymérisé est différente d’un produit à l’autre. Référez-vous attentivement à l’instruction.
ATTENTION : Certains des réactifs du système adhésif dentaire peuvent être toxiques. - Attendez environ 5 minutes et retirez le cadre et l’écrou avec précaution sans changer la position du bâton (Figure 2a).
- Injectez 0,75 mg/kg de chlorhydrate d’atipamézole par voie intrapéritonéale pour aider la souris à se remettre plus rapidement de l’anesthésie. Mettez la souris dans une cage individuelle jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie. Ne laissez pas la souris sans surveillance jusqu’à ce qu’elle ait repris une conscience suffisante pour maintenir le décubitus sternal. Le protocole peut être mis en pause ici.
3. Initiation de l’induction de la myopie et entretien par la suite
- Attendez au moins 24 h après l’opération pour permettre à la souris de se remettre complètement de l’anesthésie. Saisissez le bâton et mettez les montures avec des lentilles. L’incitation commence à ce moment (Figure 2b).
REMARQUE : Pour minimiser l’inconfort pendant la récupération de l’anesthésie et donner suffisamment de temps au système adhésif dentaire pour coaguler, il est fortement recommandé de mettre le cadre après que les souris se soient complètement remises de l’anesthésie. Le ciment résine du système adhésif couvrira entièrement la coupe du cuir chevelu. Par conséquent, aucun traitement post-chirurgical spécifique n’est nécessaire pour prévenir l’infection et atténuer la douleur post-chirurgicale. Juste après la première fois que vous mettez le cadre, les souris seront trop conscientes de l’existence de l’objectif et le rayeront beaucoup. Le comportement grossier reviendra à la normale après quelques heures. Les souris avec des lentilles peuvent être maintenues avec la même densité que les souris normales. - Retirez la monture et nettoyez les verres et le bout des ongles avec des cotons-tiges au moins deux fois par semaine pour maintenir la transparence du verre.
NOTE : Il n’est pas nécessaire de mettre la souris sous anesthésie pour retirer et mettre le cadre. Fournir un soutien sur lequel les souris peuvent s’asseoir, plutôt que de les laisser pendre pendant qu’elles travaillent avec elles, pourrait réduire la détresse. - Si une mesure intermédiaire est nécessaire, mettez la souris sous anesthésie et mesurez la souris comme décrit précédemment. L’induction peut être poursuivie après que la souris se soit remise de l’anesthésie.
- Nettoyez la cage au moins deux fois par semaine.
REMARQUE : Cela aide à maintenir la clarté de l’objectif. Il peut également être utile de mettre un filet entre la souris et le fond de la cage pour filtrer les restes de nourriture. - Surveillez le poids corporel et le comportement brut. Comparez-les avec des souris intactes du même âge pendant tout le processus expérimental.
NOTE : À l’exception de certains comportements de grattage, aucun changement significatif, y compris le poids corporel, n’est trouvé entre les souris expérimentales et les souris non traitées.
