Induction d’une contusion de la moelle épinière dans un modèle murin à l’aide d’une plate-forme coaxiale de lésion de la moelle épinière

Résumé

Source : Elzat, E. Y. Y., et al., Établissement d’un modèle de lésion de la moelle épinière chez la contusion chez la souris basé sur une technique mini-invasive. J. Vis. Exp. (2022).

Cette vidéo montre la méthode d’induction d’une lésion de contusion au niveau de la moelle épinière T9 dans un modèle murin, à l’aide d’une plate-forme coaxiale de lésion de la moelle épinière. Un poids est lâché sur la moelle épinière au niveau T9 qui crée une contusion qui provoque immédiatement une décoloration et un gonflement des tissus.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. Localisation et laminectomie de la 9^e vertèbre thoracique (T9)

REMARQUE : Des souris femelles C57BL/6J âgées de 9 à 10 semaines ont été achetées à Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, Chine).

1. Autoclavez une série d’instruments chirurgicaux pour l’expérience et stérilisez la table d’opération avec de l’alcool à 75 % avant l’opération.
2. Injecter de la buprénorphine pour l’analgésie (0,05-2,0 mg/kg, par voie sous-cutanée) 30 minutes avant l’anesthésie pour les opérations de blessure. Ensuite, anesthésie la souris avec de l’isoflurane (induction : ~3-5 %, entretien : ~1,5-2 %). Vérifiez si l’animal est complètement anesthésié par les réflexes de la queue ou du pincement des orteils. Une fois l’anesthésie en vigueur, placez la souris en position couchée dans une partie désignée de la table d’opération et enduisez la cornée d’une pommade ophtalmique (appliquez une pommade ophtalmique sur les cornées pour protéger les yeux du dessèchement pendant la chirurgie).
   1. Rasez les cheveux de la caudale au rostral avec un rasoir électrique sur la colonne thoraco-lombaire. Stérilisez la peau plusieurs fois en mouvements circulaires avec de l’iodophore pendant 30 s, suivi d’un alcool à 75 %. Appliquez un champ chirurgical stérile et faites une incision longitudinale d’environ 1,5 cm sur la peau à partir de la 6^e vertèbre thoracique (T6) jusqu’à la 13^e vertèbre thoracique (T13) à l’aide d’un scalpel et d’une lame.
      REMARQUE : Palper le long de la marge costale jusqu’à la ligne médiane, où se trouve la 12^e vertèbre thoracique (T12) - T13 espace interépineux. Faites une incision de 1,5 cm au rostral, et l’incision est à peu près au ras des vertèbres T6-T13.
3. Explorez la côte 13^th d’un côté de la partie osseuse sous le microscope opératoire. Explorez l’apophyse épineuse sur la ligne médiane en touchant légèrement la zone de l’angle costo-vertébral, puis vers le rostral pour localiser l’espace interépineux du T12-T13. Explorez l’espace interépineux de la vertèbre thoracique T9 - 10^th (T10) de l’espace de la T12-T13 à la face rostrale. (Figures 1A, 2A)
4. Disséquez le muscle paraspinal le long de l’apophyse épineuse du T9 jusqu’aux articulations des facettes antérieure et postérieure des deux côtés avec des micro-ciseaux (Figure 2B). Rétractez les muscles paraspinaux avec des micro-écarteurs et nettoyez les tissus mous sur la lame et dans l’espace interépineux de la 8^e vertèbre thoracique (T8) - T9 et T9-T10 avec des micro-ciseaux.
5. Effectuez une laminectomie T9, clampez l’apophyse épineuse de T9 avec une pince de microchirurgie, soulevez-la légèrement, insérez les micro-ciseaux parallèlement le long du côté dorsolatéral droit de la lame, en évitant d’endommager la moelle épinière, et coupez la lame avec des micro-ciseaux. Répétez l’opération sur le côté gauche, et la moelle épinière peut être exposée (Figure 1B, 2C).
6. Avant de fixer la vertèbre, desserrez le bras universel et serrez lentement les articulations facettaires de 9^th à 10^th des deux côtés de la vertèbre avec la pince à micro-moustiques du stabilisateur vertébral. Serrez les vis de la micro pince à moustiques, et la vertèbre est ainsi stabilisée. Ajustez la moelle épinière au plan horizontal, serrez le bras universel et fixez la vertèbre (Figure 2D).

2. Contusion T9

1. Une fois que la moelle épinière de niveau T9 est exposée et que la vertèbre est fixée, visez la moelle épinière par la pointe à l’intérieur du manchon sous le microscopique opératoire (Figure 2E).
2. Vérifiez si la surface de l’extrémité est parallèle à la moelle épinière à partir des faces postérieure et latérale de la moelle épinière, car il est facile d’observer la relation entre la moelle épinière et l’extrémité au microscope et la table d’opération peut être tournée facilement.
3. Vérifiez si la surface de la pointe est parallèle aux bords bilatéraux de la lame épargnée avant que la pointe ne soit en contact avec la moelle épinière après la laminectomie, car il s’agit d’un plan de référence naturel parallèle à la moelle épinière.
4. Après avoir localisé l’espace interépineux du T12-T13, abaissez le manchon jusqu’à ce que l’extrémité de l’élément de frappe corresponde à la marque sur la fenêtre d’observation et que la hauteur spécifiée de 22 mm soit atteinte. Tirez sur la goupille pour libérer le poids (1,3 g, 2,0 g ou 2,7 g selon le groupe, chaque groupe comprenant 3 souris et chaque groupe ayant une souris pour chaque point temporel).
   REMARQUE : La moelle épinière doit être parallèle au sol et perpendiculaire à la pointe ; Déplacez la table d’opération pour assurer le champ visuel microscopique, car la table est très compacte.
5. Retirez l’impacteur lorsque la contusion est terminée et observez le degré de lésion de la moelle épinière (LME) au microscope opératoire. Dans le groupe léger, une altération de la couleur rouge clair peut être observée, tandis que dans le groupe modéré, le site de la blessure présente un rouge foncé en 3-4 s et, éventuellement, une éminence peut être observée. Dans le groupe sévère, les manifestations rouge foncé peuvent apparaître immédiatement, et une éminence évidente dans la dure-mère se manifeste, mais la dure-mère est toujours dans une forme cohérente (Figure 2F).

Résultats

Graphique 1. Un graphique d’imagerie de la méthode de localisation des vertèbres costovertébrales T13. (A) La côte 13^th et T13 sont des structures anatomiques relativement constantes. L’angle costo-vertébral T13 peut être facilement détecté au microscope, à partir duquel l’opérateur peut sonder vers l’apophyse épineu...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ethanol	Fuyu Reagent	64-17-5
Microscope fluorescent	KEYENCE	BZ-X800
Mice	Jinan Pengyue Experimental AnimalCompanyCompany	C57BL/6J
Appareil de microchirurgie	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Tous les instruments chirurgicaux sont fabriqués sur mesure	Ciseaux ophtalmiques, pinces micro-moustiques, pinces de microchirurgie, micro-ciseaux
RWD Station d’anesthésie par inhalation	RWD Life Science Co., Ltd<
Système d’imagerie microCT in vivo pour petits animaux	PerkinElmer	Quantum GX2
Plateforme coaxiale pour lésions de la moelle épinière	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Sur mesure (norme de Feng)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_ id=0&slg=tagGood List-default %2COpBottom %2Cuuid  %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

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