Génération d’un modèle de souris avec une lésion de la moelle épinière

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation d’instruments chirurgicaux et non chirurgicaux

1. Stériliser les instruments chirurgicaux et non chirurgicaux dans un autoclave.
2. Nettoyez la table d’opération chirurgicale avec de l’éthanol à 70 % et réchauffez un coussin chauffant à 37 °C.
3. Placez le coussin chauffant sur la table d’opération et couvrez-le de champs chirurgicaux stériles.
   REMARQUE : Dans toutes les procédures de survie, la technique « No Touch » est utilisée ici pour maintenir la stérilité.

2. Préparation des animaux et réalisation de la laminectomie spinale T9-T10

1. Procurer des souris mâles adultes (Balb/c) âgées de 10 semaines. Induire l’anesthésie chez chaque animal à l’aide d’un inhalateur, en commençant par 5 % d’isoflurane, puis en diminuant à 2-3 % pour maintenir la sédation pour le reste des procédures.
2. Confirmer l’anesthésie complète en ne suscitant aucune réponse à une stimulation de nociception induite par le pincement de la queue ou de la patte.
3. Rasez les poils sur le dos (de la tête à la queue) à l’aide d’une tondeuse électrique, puis appliquez la crème dépilatoire (3 min) pour enlever les poils restants. Enfin, lavez le dos à l’eau courante/broussaillage humide et remettez les animaux dans leurs cages.
   REMARQUE : Ceci est nécessaire pour éviter une irritation supplémentaire de la peau et une contamination chimique au moment de la blessure cutanée
4. Le lendemain, appliquez une pommade ophtalmique sur les cornées pour protéger les yeux du dessèchement pendant l’intervention chirurgicale. Ensuite, frottez la peau avec 3 préparations alternatives de gommage à la bétadine et d’éthanol à 70 %.
5. À l’aide d’un scalpel, effectuez une incision cutanée (~1,0-1,5 cm) le long de la ligne médiane du dos au niveau des vertèbres T8-T12.
   REMARQUE : Le niveau des vertèbres est identifié en comptant la vertèbre à partir de T13 en utilisant l’emplacement des côtes flottantes qui correspondent à la vertèbre T13.
6. Nettoyez le tissu adipeux sous-cutané pour accéder aux muscles paraspinaux, puis disséquez-les lentement pour exposer les apophyses épineuses et les lames des deux côtés.
   REMARQUE : Faites cette procédure très soigneusement pour éviter un saignement excessif ou toute blessure à la moelle épinière à ce stade.
7. Effectuez une laminectomie pour exposer la moelle épinière (vertèbres T9-T10) en décollant doucement la lame de la colonne vertébrale à l’aide d’une pince de microdissection.
   REMARQUE : Effectuez la laminectomie de manière à ce qu’un excès de moelle épinière soit exposé pour faciliter la création de la blessure. Dans le groupe témoin, seule la laminectomie est effectuée.

3. Réalisation de la lésion complète de la moelle épinière (LME) T9-T10

1. À l’aide d’une pince, fixez la colonne vertébrale à T8 et soulevez-la pour exagérer la courbure de la colonne vertébrale.
2. À l’aide de ciseaux fins, sectionnez la moelle épinière entre les vertèbres T9 et T10 jusqu’au plancher du canal vertébral pour assurer une transition complète.
3. Après avoir observé la section complète sous un microscope chirurgical, appliquez un morceau de graisse sous-cutanée sur le site de laminectomie pour fournir une protection supplémentaire à la moelle épinière avant la fermeture du site chirurgical.
4. Enfin, fermez la plaie et suturez les muscles paravertébraux et le fascia superficiel à l’aide de sutures continues, puis fermez la peau à l’aide de clips de suture.
5. Après une lésion médullaire, observez les selles le lendemain ; Cependant, gérez la vessie par une évacuation manuelle de la vessie.
   REMARQUE : L’échelle de souris Basso (BMS) peut être utilisée pour surveiller la progression de la récupération fonctionnelle des membres postérieurs après une LME le jour 2, puis chaque semaine.