Procédé d’élimination hydrophobe des tissus pour un échantillon de tissu cérébral de rat

Résumé

Source : Kirchner, K.N., et al., Une méthode hydrophobe de nettoyage des tissus pour le tissu cérébral du rat. J. Vis. Exp. (2020).

Cette vidéo montre la méthode d’élimination des tissus hydrophobes d’un échantillon de tissu cérébral de rat. L’échantillon est déshydraté séquentiellement dans du méthanol, traité avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol pour dissoudre les lipides et les pigments, et transféré dans de l’éther dibenzylique pour une clarification complète des tissus, permettant une imagerie détaillée sans coupe mince.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Nettoyage des tissus

1. Incuber l’échantillon dans une solution de méthanol à 20 % et d’eau déminéralisée à 80 % pendant 1 h à température ambiante (RT).
2. Incuber l’échantillon dans une solution d’eau déminéralisée à 40 % de méthanol et à 60 % pendant 1 h à RT.
3. Incuber l’échantillon dans une solution d’eau déminéralisée à 60 % de méthanol et à 40 % pendant 1 h à RT.
4. Incuber l’échantillon dans une solution de méthanol à 80 % et d’eau déminéralisée à 20 % pendant 1 h à RT.
5. Incuber l’échantillon dans du méthanol à 100 % pendant 1 h à RT.
6. Incuber dans du méthanol frais à 100 % pendant la nuit à RT.
7. Incuber dans du dichlorométhane à 66 % (DCM)/33 % de méthanol pendant 3 h, avec agitation, à RT.
8. Incuber dans de l’éther dibenzylique (DBE) sans agiter. Laissez l’échantillon dans DBE jusqu’à ce qu’il soit clair et stockez-le dans DBE jusqu’à l’imagerie.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DBE	Sigma-Aldrich	108014-1KG
DCM	Sigma-Aldrich	270997-100mL
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1l-R