Microscopie à deux photons d’astrocytes et de neurones excitateurs dans un tissu hippocampique de souris dégagé

Résumé

Source : Refaeli, R., et al., Étude de l’interaction spatiale entre les astrocytes et les neurones dans les cerveaux nettoyés. J. Vis. Exp. (2022)

La vidéo montre la préparation d’une chambre et la neuroimagerie de tissus hippocampiques de souris nettoyés à l’aide de la microscopie à deux photons pour visualiser les interactions spatiales entre les astrocytes marqués par fluorescence et les neurones excitateurs.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Préparation de la chambre

REMARQUE : Chaque échantillon nécessite une lame avec une chambre d’imagerie dans laquelle l’échantillon sera placé.

1. Place l’échantillon au milieu de la diapositive.
2. À l’aide d’un pistolet à colle chaude, créez des murs sur les bords du toboggan, presque aussi hauts que le tissu. Assurez-vous de laisser un petit espace (environ 5 mm) à l’un des coins (Figure 1A, B).
3. Appliquez 1 à 2 gouttes de la solution d’appariement de l’indice de réfraction ou RIMS sur l’échantillon pour garder la surface supérieure humide et empêcher la formation de bulles entre la lamelle et le tissu.
4. Immédiatement après l’application de la solution d’appariement d’indice de réfraction), ajoutez la dernière couche de colle chaude sur les parois (afin qu’elles atteignent la hauteur du cerveau/de la tranche) et passez immédiatement (pendant que la colle chaude est encore liquide) à l’étape 1.5.
5. Scellez le dessus à l’aide d’une lamelle, en le plaçant aussi uniformément que possible sur le dessus de la couche de colle chaude encore chaude (Figure 1C).
6. Remplissez la chambre avec le RIMS à travers l’espace laissé dans les parois de la colle chaude (Figure 1D, E).
7. Fermez l’espace avec de la colle chaude. Ne laissez pas d’air à l’intérieur (Figure 1F).
8. Si les parois de colle chaude dépassent les bordures de la diapositive, coupez les bords extensibles (Figure 1G).
9. Si l’objectif utilisé pour l’imagerie est immergé, ajoutez encore 2-3 mm de colle sur les parois au-dessus de la lamelle afin que la solution d’immersion dure plus longtemps (Figure 1H).

Résultats

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Matériaux