Imagerie micro-TDM avec produit de contraste de lésions de malformation caverneuse cérébrale dans le cerveau d’une souris

Résumé

Source : Choi, J. P. et al. Induction et imagerie micro-TDM de malformations caverneuses cérébrales dans un modèle murin. J. Vis. exp. ( 2017)

Cette vidéo montre l’utilisation de l’imagerie micro-TDM pour visualiser les lésions de malformation caverneuse cérébrale (CCM) dans le cerveau d’une souris. Il détaille les étapes de préparation des échantillons, d’imagerie et de reconstruction d’images 3D afin d’évaluer la densité et l’emplacement des lésions CCM dans le tissu cérébral.

Protocole

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p style='hauteur-de-ligne :1.2 ;margin-bottom :0pt ;margin-top :0pt ;text-align :justify ;' dir='ltr'>Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. préparation d’échantillons pour les tomodensitométries (CT) Scans

1. Euthanasier les petits nouveau-nés à P8 par asphyxie au dioxyde de carbone.
2. Effectuez une perfusion intracardiaque en insérant une aiguille de calibre 29 avec 3 ml de paraformaldéhyde à 2 % dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) dans une seringue de 10 ml dans le ventricule du cœur de la souris.
   ATTENTION : Le paraformaldéhyde est toxique ; porter une protection appropriée.
3. Détachez la tête du corps à l’aide de ciseaux. Retirez toute la peau de la tête à l’aide de ciseaux et décollez le crâne à l’aide d’une pince pour disséquer tout le cerveau.
4. Prenez des images du cerveau avec un stéréomicroscope avec un grossissement de 7,82x, un gain de 1x, un gamma de 0,6 et un temps d’exposition de 20 ms.
5. Fixez les cerveaux disséqués avec 4 % de paraformaldéhyde dans une solution de PBS pendant la nuit.
   ATTENTION : Le paraformaldéhyde est toxique ; porter une protection appropriée.
6. Le lendemain, détachez les cerveaux postérieurs à l’aide d’une pince et lavez-les avec une solution PBS.
7. Incuber les cerveaux postérieurs dans la solution iodée de Lugol pendant 48 h.
8. Après l’incubation, séchez brièvement les cerveaux postérieurs à l’air libre pour éliminer l’excès de solution iodée de Lugol.
9. Emballez les cerveaux postérieurs teintés à l’iode du Lugol dans des tubes de microcentrifugation de 0,65 ml et scellez-les complètement avec un film de paraffine plastique pour éviter le rétrécissement des tissus (Figure 1A).
10. Placez les tubes de microcentrifugation dans des tubes en plastique de 5 mL avec des éponges pour les empêcher de bouger pendant le balayage (Figure 1B).

2. Micro-CT Scan des malformations caverneuses cérébrales (CCM) dans le cerveau de la souris

1. Montez verticalement le cerveau postérieur emballé dans un tube sur un support en aluminium dans le système de micro-CT.
2. Réglez les paramètres de balayage sur 540 projections et un temps d’exposition de 2 s avec des conditions de source de 50 kV et 10 W pour acquérir les ensembles de données tomographiques (résolution d’image 9,5 μm/pixel).
3. Les radiographies du balayage sont reconstruites automatiquement par un logiciel de reconstruction de projection basé sur le matériel fourni par le système de micro-tomodensitométrie, produisant une série d’images de coupes axiales de 16 bits (fichier « TXM »).

3. Analyse des ensembles de données Micro-CT

1. Ouvrez le fichier image reconstruit (fichier « TXM ») dans le logiciel d’analyse 3D et visualisez le cerveau à l’aide de la fonction « volume rendering ».
2. Transformez le cerveau postérieur dans l’orientation souhaitée à l’aide des fonctions « boîte englobante » et « plan de coupe ».
3. Rééchantillonnez l’image transformée en mode étendu et conservez la taille du voxel.
4. Créez « Modifier le nouveau champ d’étiquette » sur l’image transformée (3.3) et mettez en évidence uniquement le cerveau postérieur en utilisant l’intensité des niveaux de gris.
5. Ajoutez les zones en surbrillance et exécutez « l’analyse d’étiquette » pour obtenir des mesures de l’ensemble du cerveau postérieur (i.e., volume total et surface). Exportez les mesures dans un fichier Excel.
6. Visualisez le cerveau postérieur à l’aide de la fonction de « rendu isosurface ».
7. Créez un autre champ « Modifier une nouvelle étiquette » sur l’image transformée et mettez en évidence les zones présentant des lésions à l’aide de l’intensité des niveaux de gris.
8. Ajoutez les zones en surbrillance et exécutez l’analyse « étiquette » pour obtenir des mesures des lésions dans le cerveau postérieur (i.e., volume total et surface). Exportez les mesures dans un fichier Excel.
9. Visualisez les lésions à l’aide des fonctions « générer surface » et « vue de surface ».
10. Capturez les images du cerveau postérieur dans les orientations souhaitées ou générez un film pour la visualisation 3D des lésions.

Résultats

Matériaux