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Research Article
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Cette vidéo présente une méthode de balayage par fluorescence proche infrarouge et haute résolution pour mesurer l’expression des protéines dans le cerveau des rongeurs.
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p style='line-height :1.2 ;margin-bottom :8pt ;margin-top :0pt ;' dir='ltr'>Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’examen de l’éthique animale approprié.1. Imaging
1. Placez les lames sur l’interface de balayage proche infrarouge avec le tissu vers le bas. Imagez une diapositive de verre ou plusieurs diapositives à la fois à l’aide d’un outil de sélection.
2. L’image est slides en utilisant le réglage de qualité le plus élevé avec un décalage de 0 nm et une résolution de 21 μm. Le balayage dure généralement de 13 à 19 h, selon l’équipement de balayage utilisé.
3. Importez des images dans le logiciel d’analyse d’images (par exemple, Image Studio) pour les visualiser et les marquer pour les protéines semi-quantitatives analyse.
2. Analyse de l’expression des protéines
1. Ouvrez le logiciel d’analyse d’images et sélectionnez le Zone de travail dans lequel l’image a été scanné.
2. Ouvrez l’image numérisée dans le logiciel d’analyse d’images pour afficher le scan, et ajustez également les longueurs d’onde affichées comme le contraste, la luminosité et le grossissement montrés sans altérer l’image brute ou l’émission totale quantifiée.
3. Identifiez les régions clés pour la quantification et sélectionnez l’icône Analysis tab en haut de la page, puis select Draw Rectangle (ou Draw Ellipse/ Draw Freehand) pour dessiner un rectangle sur la zone qui sera quantifiée.
4. Pour afficher la taille du rectangle, sélectionnez Shapes en bas à gauche de l’écran, puis sélectionnez Columns en bas à droite. Add Height et Width colonnes pour identifier la taille de la forme.
REMARQUE : Il est important de contrôler la taille de la forme lors de la comparaison de la quantification. Il est recommandé d’utiliser des formes identiques placées à l’emplacement de quantification souhaité, afin d’obtenir un échantillonnage précis des émissions pour cette région.
5. Ensuite, nommez la forme et répétez. Une fois que toutes les régions sont échantillonnées, les données disponibles à partir de la columns tab peut être agrégés et analysés.
